[发明专利]一种利用猪小肠制备肝素钠的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及到一种用猪小肠制备肝素钠的方法。

背景技术

肝素是一种广泛存在于哺乳动物组织中的黏多糖，主要存在与肥大细胞中，具有抗凝血作用，被广泛用于手术和脑血栓、心肌梗死等的治疗。肝素的分子量大约3000-37500，对商品肝素的研究提示至少有21种分子个体。肝素钠是肝素的钠盐。肝素钠作为天然抗凝血物质受到世界各国的重视。也是我国主要的出口药物之一。随着研究的深入，人们发现肝素钠不但有抗凝、抗血栓形成和调节血脂的作用，还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等功能。目前，肝素钠主要是从猪、羊小肠黏膜和牛肺、盹肠衣盐水等中提取。研究显示肝素钠是在猪小肠粘膜中含量最高。肝素钠粗品是我国的传统出口产品，在国际上占有重要的地位。但是传统生产工艺落后，肝素钠产率低，肝素钠产品质量不稳定，

生产过程中资源浪费严重，污染环境严重。

发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种收率高、肝素钠活性损失小的利用猪小肠生产肝素钠的制备方法。

发明是通过如下技术方案实现的：

一种利用猪小肠生产肝素钠的制备方法，其特征是：包括如下步骤：

(1)肠粘膜的制备：在猪小肠内灌入清水，用肠衣机挤压出小肠粘膜至粘膜池；

(2)酶解：用粘膜泵将粘膜从粘膜池打入酶解罐中，往酶解罐中加水，粘膜与水的重量比为1∶7-9，搅拌均匀后加入2709碱性蛋白酶调节PH值为8-9，加热使温度达到55℃-60℃，再加入重量百分比为3％-5％的肠衣专用盐，测其盐度达到2％-2.5％，保温2-3小时，继续加热使温度达到80℃-85℃，保温30-40分钟后，用80目尼龙布过滤，收集过滤液；

(3)吸附：将上述过滤液打入吸附罐中，搅拌，待温度降到58℃-60℃时加入树脂，搅拌8-10小时，继续冷却到40℃-45℃，放出废液，收集过滤树脂；

(4)洗脱：

(4-1)：将收集的树脂反复冲洗后倒入洗脱器中，加入质量分数为5％-7％的盐水，温度保持在50℃-55℃，搅拌30-40分钟；

(4-2)：随后将废液倒掉，加入质量分数为20％-24％的盐水，温度保持在50℃-55℃，搅拌3-4小时后，收集洗脱液；

(4-3)：重复(4-2)的步骤，将两次收集的洗脱液合并待用；

(5)沉淀脱盐：

将上述洗脱液过滤移入沉淀罐中，边搅拌边加入质量分数为80％-85％的乙醇，调PH值至7-8，搅匀密封沉淀23-25小时，虹吸上层清液用于回收乙醇，收集沉淀物待用；

(6)脱水干燥：将上述沉淀物滤干脱水，放入烘箱干燥后即得肝素钠。

步骤(2)酶解中粘膜与2709碱性蛋白酶的重量比为500∶1。

说明书

步骤(3)吸附中树脂的添加量按每根猪小肠加入20-30克树脂的比例添加。

步骤(4-1)中树脂与加入的质量分数为5％-7％盐水的重量比为1∶1.1-1.3，步骤

(4-2)中树脂与加入的质量分数为20％-24％盐水的重量比为1∶1.1-1.3。

步骤(4-3)收集完洗脱液后，再接着加入质量分数为20％-24％的盐水，温度保持在50℃-55℃，搅拌30-40分钟后，收集洗脱液做高浓度盐水循环使用。

步骤(5)沉淀脱盐中搅拌加入预冷过的乙醇。

步骤(5)沉淀脱盐中洗脱液与乙醇的体积比为1∶1.8-2.2。

步骤(6)脱水干燥中烘箱的温度为80℃-90℃，干燥时间为6-8小时。

上述步骤(3)吸附中，所加树脂为德国拜耳树脂；步骤(4)洗脱中，盐水是指用肠衣专用盐所配制的水溶液。

为了使粘膜刮制容易，常习惯将小肠浸泡24-48小时，这样能保护肠衣免受破损，但长时间浸泡会发酵产生肝素酶，分解肝素钠，此外发酵还会产生一些有害物质，使树脂中毒，因此在浸泡时间上一定要准确把握，夏季适当缩短时间，冬季可适当延长时间，在弱碱性或质量分数为4％的盐水条件下，能减缓微生物的发酵和抑制肝素酶活性，可以放于低温处作短期贮存。

乙醇沉淀时，必须在搅拌的同时逐渐加入乙醇，以避免局部乙醇浓度突然增高，而且乙醇要用预冷过的，否则就会使肝素钠的部分空间构象受到破坏，从而降低其活性。

酶解、吸附肝素钠过程中的废液(煮锅废水)，气味恶臭，致使生产车间空气环境及其混乱，使人难以忍受，甚至影响工作人员的身心健康。为此本发明采用车间废气净化处理装置，大大减少了空气中的恶臭气味，极大改善了工作环境。