[发明专利]一种基于TRAIL受体信号通路的抗肿瘤药物筛选系统

权利要求书

1.一种基于TRAIL受体信号通路的抗肿瘤药物筛选系统，其特征在于：所述系统由含DR5启动子与荧光素酶报告基因的融合基因的细胞、细胞培养裂解试剂，荧光素酶检测底物构成。

2.根据权利要求1所述的基于TRAIL受体信号通路的抗肿瘤药物筛选系统，其特征在于：所述含DR5启动子与荧光素酶报告基因的融合基因的细胞是含DR5启动子与荧光素酶报告基因的融合基因的非小细胞肺癌细胞A549，命名为：A549-pDR5-luc；或是含DR5启动子与荧光素酶报告基因的融合基因的非小细胞肺癌细胞H157，命名为：H157-pDR5-luc；所述细胞培养裂解试剂为promega公司的荧光素酶检测系统中的细胞培养裂解试剂；所述荧光素酶检测底物为promega公司的荧光素酶检测系统中的荧光素酶检测底物。

3.权利要求2所述的基于TRAIL受体信号通路的抗肿瘤药物筛选系统在筛选抗肿瘤药物中的应用，步骤是：

1）选择所构建的A549-pDR5-luc或H157-pDR5-luc细胞以6×10⁴个/孔细胞接种于含5%血清的RPIM1640培养基的24孔板中，在37℃，5%CO₂，饱和湿度的培养箱中培养24—48h；

2）选取待筛选的化合物，根据其特性先溶解为1mM—10mM浓度的溶液，然后将溶解好的化合物按终浓度是0—40μM的梯度浓度加入到步骤1）培养的细胞中，同时每种浓度设置3个平行孔，然后处理6—12h；

3）待处理结束时，弃掉各孔中的细胞培养基，再用PBS清洗一次细胞，然后每孔中加入200—250μL细胞裂解液，使裂解缓冲液完全覆盖细胞，并在4℃静置，裂解处理30—40min；

4）充分吹打裂解后的细胞，将所有的细胞碎片和液体转移至离心管中，在4℃的离心机中，13000±500rpm下离心2—5min；

5）取15μL离心后样品的上清液与10μL荧光素酶检测底物共放入荧光光度计试管中混匀并使其反应；

6）将反应后的试管放入荧光光度计中进行检测，记录数据并求取平均值，根据检测的数值判断该待筛选的化合物是否有抗肿瘤活性；当待筛选的化合物药物处理组的检测数值减去对照组的检测数值大于5000时，说明该待筛选的化合物能明显诱导DR5启动子的活化，预示该化合物为潜在的抗肿瘤化合物。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述待筛选的化合物是合成化合物、天然产物、有机小分子、无机小分子、脂类、糖类中的一种或几种。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述待筛选的化合物是从天然植物中提取的化合物2’-羟基，4’,5’-二甲氧基査尓酮（DHMC）或豆蔻明（Cardamonin）。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述对照组的检测数值对于A549-pDR5-luc细胞，空白对照组数值一般为4000±500；对于H157-pDR5-luc细胞，空白对照组数值一般为8000±500。