[发明专利]一种基于TRAIL受体信号通路的抗肿瘤药物筛选系统

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗肿瘤药物筛选系统，尤其涉及一种基于TRAIL受体信号通路的抗肿瘤药物筛选系统。

背景技术

癌症目前已成为人类最主要的致死疾病之一，严重威胁着人们的寿命。我国城乡居民恶性肿瘤死亡率已属于世界较高水平，而且呈持续的增长趋势。中国每年癌症新发病例为220万，因癌症死亡人数为160万人。其中，肺癌和乳腺癌在过去的30年分别上升了465%和96%。恶性肿瘤已成为我国城市居民的第一位死亡原因，农村居民的第二位死亡原因。因此，我们对于肿瘤预防和治疗的研究已刻不容缓。

化学疗法是目前治疗癌症的重要手段之一，寻找安全有效地化疗药物就显得尤其重要。近年来，分子靶向药物因其治疗作用的高特异性和可以大幅度减低患者发生副作用的风险而成为抗肿瘤研究的热点。随着我们对肿瘤细胞中TRAIL受体信号通路的研究不断深入，发现此通路中的死亡受体DR5是很有潜力的肿瘤治疗的新靶标。

多种肿瘤预防及化疗药物均明显激活TRAIL受体信号通路，抑制此通路将显著降低药物诱导肿瘤细胞凋亡的效率。很多抗肿瘤药物上调TRAIL受体信号通路中DR5的表达，例如，本实验室发现蛋白酶体抑制剂硼替佐米（英文名PS-341）就是通过上调DR5的表达，而激活受体介导的凋亡信号通路。本实验室的工作还证明很多种进入临床实验的化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡也都需要激活死亡受体信号通路，TRAIL受体信号通路能否被激活也直接影响着肿瘤化疗的效果。

随着生物技术的发展，以及对人类疾病的分子机制认识的加深，一种以特定药物靶点为基础的筛选方法，也就是基于靶点药物的研究方法已经取代了传统的非特异性的方法。其中，利用工程改造的细胞进行靶向药物筛选是最具有吸引力的一种方法。这种体外检测方法需要弄清楚特定的靶分子所引发的特定细胞行为工程，而且还需要建立一种易于检测产物量的方法，比如用灵敏度较高的荧光素酶（Luciferase）或绿色荧光蛋白GFP作为报告基因等。

基于细胞的筛选方法与体外筛选方法相比有很多显著的优点。第一，不需要纯化靶蛋白，这就大大节省了成本和时间。第二，在细胞中，靶蛋白的构象、活性以及生物学功能更能接近于生理学状态。因此，经过筛选得到的先导化合物具有更高的可靠性。经检索，目前并没有基于TRAIL受体信号通路的抗肿瘤药物筛选系统的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于TRAIL受体信号通路的抗肿瘤药物筛选系统。

为了达到上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现：

本发明所述的一种基于TRAIL受体信号通路的抗肿瘤药物筛选系统是由含DR5启动子与荧光素酶报告基因的融合基因的细胞、细胞培养裂解试剂，荧光素酶检测底物构成。

上述含DR5启动子与荧光素酶报告基因的融合基因的细胞优选含DR5启动子与荧光素酶报告基因的融合基因的非小细胞肺癌细胞A549，命名为：A549-pDR5-luc；或是含DR5启动子与荧光素酶报告基因的融合基因的非小细胞肺癌细胞H157，命名为：H157-pDR5-luc；所述细胞培养裂解试剂为promega公司的荧光素酶检测系统中的细胞培养裂解试剂，主要是对细胞进行裂解；荧光素酶检测底物为promega公司的荧光素酶检测系统中的荧光素酶检测底物，其在荧光素酶作用下被氧化，并发出生物荧光。

上述的基于TRAIL受体信号通路的抗肿瘤药物筛选系统在筛选抗肿瘤药物中的应用。

本发明提供的抗肿瘤药物筛选系统利用TRAIL受体信号通路作为新的抗肿瘤药物筛选的靶标，根据TRAIL受体信号通路中标志蛋白DR5的表达情况来预测药物杀伤肿瘤细胞的效果，以期建立快速高效的抗肿瘤药物筛选系统。在应用过程中，是通过测定被筛选化合物作用于A549-pDR5-luc或H157-pDR5-luc细胞中荧光素酶报告基因表达的升高，来筛选促进TRAIL受体DR5表达的化合物，即抗肿瘤药物，因此本发明可以高效的对化合物进行筛选，确定它们是否有抗肿瘤作用。

本发明所述的基于TRAIL受体信号通路的抗肿瘤药物筛选系统在筛选抗肿瘤药物中的应用具体步骤是：

1）选择所构建的A549-pDR5-luc或H157-pDR5-luc细胞以6×10⁴个/孔细胞接种于含5%血清的RPIM1640培养基的24孔板中，在37℃，5%CO₂，饱和湿度的培养箱中培养24—48h；