[发明专利]一种转化人参皂苷Rg3生产Rh2的米曲霉、生产方法及应用

权利要求书

1.一种转化人参皂苷Rg₃生产Rh₂的米曲霉，其特征在于，所述米曲霉为米曲霉（Aspergillus oryzae）AS.mq01，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCC NO：M2013430，保藏日期：2013年9月17日。

2.一种如权利要求1所述的米曲霉在转化人参皂苷Rg₃生产Rh₂方面的应用。

3.一种如权利要求1所述的米曲霉转化人参皂苷Rg₃生产Rh₂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）菌株的准备：将米曲霉活化并发酵培养；

（2）酶液的制备：将步骤（1）的发酵液过滤，滤液离心，去除菌体沉淀，收集上清液；在上清液中加硫酸铵至60-80%饱和度；4-8℃静置过夜，离心，弃上清液，收集蛋白质沉淀；蛋白质沉淀用0.02mol/L，pH 4.5-5.5的醋酸-醋酸钠缓冲液溶解后装入透析袋，用相同的醋酸-醋酸钠缓冲液透析24-36h；透析后，离心，上清液即为粗酶液；

（3）酶液的转化反应：称取人参皂苷Rg₃，用0.02mol/L，pH 4.5-5.5的醋酸-醋酸钠缓冲液配制成人参皂苷Rg₃浓度为0.5-1mg/mL的底物反应液，与等体积的粗酶液混合，在35-45℃条件下反应24h；然后在90℃放置15min，终止反应，得到人参皂苷Rh₂。

4.根据权利要求3所述的米曲霉转化人参皂苷Rg₃生产Rh₂的方法，其特征在于，步骤（1）的具体方法如下：将米曲霉接种于PDA斜面培养基，于32-36℃培养36-48h，然后挑取菌株孢子或菌落转入麦芽汁培养基，在28-32℃、150-200rpm条件下发酵培养3天。

5.根据权利要求4所述的米曲霉转化人参皂苷Rg₃生产Rh₂的方法，其特征在于，所述PDA斜面培养基的制备方法：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15-20g，水定容至1000ml，自然pH。

6.根据权利要求4所述的米曲霉转化人参皂苷Rg₃生产Rh₂的方法，其特征在于，所述麦芽汁培养基的制备方法：将干麦芽粉碎，1重量份麦芽加4重量份水，在65℃水浴锅中糖化3-4h，将糖化液用纱布过滤后稀释至5-6波美度，得到麦芽汁培养基。

7.根据权利要求3所述的米曲霉转化人参皂苷Rg₃生产Rh₂的方法，其特征在于，所述离心条件为：离心温度15-20℃、转速10000-13000rpm、离心时间10-20min。