[发明专利]一种用液相色谱法分离测定枸橼酸托法替尼及其光学异构体的方法

说明书

 

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种用液相色谱法分离测定枸橼酸托法替尼及其光学异构体的方法。

 

背景技术

枸橼酸托法替尼是一种治疗类风湿关节炎的药物，主要机理是JAK-1和-3酪氨酸激酶抑制剂，其化学名为3-((3R,4R)-4-甲基-3-(甲基(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙腈·枸橼酸盐（1:1），英文名为Tofacitinib Citrate，分子式为C₁₆H₂₀N₆O·C₆H₈O₇，结构式为：

枸橼酸托法替尼分子中含有2个手性碳原子，有RR、RS、SR、SS四种光学异构体，其中RR构型是有效的JAK-1和-3酪氨酸激酶抑制剂，而其他构型并无生物等效性，因此，在药物合成过程中需要对光学异构体进行严格的质量控制。含多个手性碳原子的对映异构体的分离一直是手性药物合成和制剂过程中质量控制的难点，因此，实现枸橼酸托法替尼及其光学异构体的分离在枸橼酸托法替尼的合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。

现有技术（Jian-kang Jiang et al. Examining the Chirality, Conformation and Selective Kinase Inhibition of 3-((3R,4R)-4-methyl-3-(methyl(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)amino) piperidin -1-yl ) -3-oxopropanenitrile (CP-690,550). J. Med. Chem. 2008, 51, 8012–8018）公开了一种以Daicel Chiralpak OD手性色谱柱为分离柱，以100%甲醇为流动相，分离测定托枸橼酸托法替尼及其光学异构体的方法。经验证，该方法可以将枸橼酸托法替尼RR构型与其他构型分离，出峰顺序分别为SR构型，RR构型，SS构型以及RS构型，但是有两个缺点：一是此分析方法在分离四个光学异构体时，四个组分并能不相互之间达到基线分离，SS构型和RS构型有部分重合，不能完全分离；二是采用此分析方法检测在枸橼酸托法替尼RR构型中加入其他构型时，并未达到理想的检测限（≤0.10%），从而导致检测限较低，无法准确测定成品中光学异构体的含量，不能有效地控制枸橼酸托法替尼的质量。

经过大量的反复试验，本发明人发现，用三（3，5-二氯苯基）-氨基甲酸酯纤维素或者三（3，5-二甲基苯基）-氨基甲酸酯纤维素为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇-胺溶液为流动相，即可以将枸橼酸托法替尼及其光学异构体进行有效分离，该方法下基线平稳，主峰峰形较好，检测限较高，从而可以准确控制枸橼酸托法替尼的质量。

 

发明内容

本发明的目的在于提供一种用高效液相色谱分离测定枸橼酸托法替尼及其光学异构体的方法，从而实现枸橼酸托法替尼及其光学异构体的分离与测定。

本发明所述的用高效液相色谱分离测定枸橼酸托法替尼及其光学异构体的方法，是以三（3，5-二氯苯基）-氨基甲酸酯纤维素或者三（3，5-二甲基苯基）-氨基甲酸酯纤维素为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇-胺溶液为流动相。所述高效液相色谱方法包括高效液相色谱法或高效液相色谱法-质谱法联用。

上述本发明的方法，所述手性色谱柱为选自牌号为Daicel  CHIRALPAK IC和Sepax MS Chiral MS-5的色谱柱。

上述本发明的方法，所述低级醇选自甲醇、无水乙醇、丙醇和异丙醇，优选为无水乙醇或异丙醇；所述胺为二乙胺或三乙胺，其中，流动相中正己烷-低级醇的体积比为55:45~85:15，胺浓度为正己烷（V/V）的0.05%~0.5%。

在一具体实施方案中，本发明的一种用高效液相色谱法分离测定枸橼酸托法替尼及其光学异构体的方法，包括：采用三（3，5-二氯苯基）-氨基甲酸酯纤维素或者三（3，5-二甲基苯基）-氨基甲酸酯纤维素为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇-胺溶液为流动相，所述胺为二乙胺或者三乙胺，其浓度为正己烷的0.05%~0.5%V/V，正己烷-低级醇的体积比为55:45~85:15。

在上述具体实施方案中，所述手性色谱柱选自Daicel CHIRALPAK IC和Sepax MS Chiral MS-5牌号的色谱柱。