[发明专利]纯化水溶性氧化铁纳米粒子链霉亲和素偶联物的方法

权利要求书

1.一种纯化水溶性氧化铁纳米粒子链霉亲和素偶联物的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将水溶性羧基修饰的氧化铁纳米粒子活化，加入链霉亲和素溶液，调整溶液pH至7.5～8.5后，偶联反应；（2）偶联反应结束后，溶液中加入单端氨基化聚乙二醇（HO-PEG-NH₃）封闭偶联产物中氧化铁纳米粒子表面残留的羧基，将反应溶液pH值调整至弱酸性；（3）用磁场强度为100 T/m SuperMag^TM分离器或高速离心，弃上清液，取沉淀。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（3）后，还有将沉淀用含25%甘油，0.01% NaN₃的0.05 mol/L pH 7.0～7.5磷酸盐缓冲液溶解步骤。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于水溶性氧化铁纳米粒子为核壳结构的氧化铁纳米粒子，壳层由双亲聚合物组成，外部为大量亲水羧基表面，内层为长链疏水基团通过与三辛基氧化磷的疏水作用将油溶性氧化铁纳米粒子包裹在壳层内部。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1）中活化为将水溶性羧基修饰的氧化铁纳米粒子溶解于pH 5.0～6.0，0.05 mol/L硼酸盐缓冲液中，分别加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺以及N-羟基硫代琥珀酰亚胺，37℃反应2小时，活化水溶性氧化铁纳米粒子羧基。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺以及N-羟基硫代琥珀酰亚胺与氧化铁纳米粒子的摩尔比均为100～200：1，优选为150:1；所述IgG类链霉亲和素偶联物与氧化铁纳米粒子的摩尔比为1～10：1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于偶联反应结束后，在溶液中加入单端氨基化聚乙二醇（HO-PEG-NH₃）至单端氨基化聚乙二醇终浓度为1%～2%，充分混匀15～30分钟。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（2）中将反应溶液pH值调整至弱酸性为将pH值调整至4.5～5.0，优选为5.0。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在在于步骤（3）所述高速离心离心力为28，000～30，000 g。