[发明专利]一种胰蛋白酶精品的生产工艺

权利要求书

1.一种胰蛋白酶精品的生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：(1)原料绞碎，抽提酶原；(2)分级盐溶、盐析；(3)结晶，得胰蛋白酶粗品；(4)粗品投料，多重结晶；(5)活化；(6)结晶；(7)透析；(8)冻干。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，各步骤具体为：

(1)提取：将动物的胰脏绞碎成胰浆，用硫酸溶液浸渍，过滤，留取滤液；

(2)盐溶、盐析：滤液中加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达到30-50％，静置，过滤，留取滤液；滤液中加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达到50-80％，静置，过滤，留取滤饼；所得滤饼加水溶解，加入饱和硫酸铵溶液，调节pH值至4.0-5.5；

(3)结晶：溶液静置至有针状糜蛋白酶结晶析出；离心，调节pH值至2.0-5.0，在溶液中加入固体硫酸铵，抽滤；取沉淀物，干燥，即得胰蛋白酶粗品；

(4)投料：取胰蛋白酶粗品，加水溶解，调节pH，搅拌；加入硫酸铵，溶解，静置；过滤，滤饼加水，搅拌溶解，调节pH，加入饱和硫酸铵溶液，静置；过滤，滤液中加入饱和硫酸铵溶液，静置；洗镁，待活化；

(5)活化：将滤饼溶于盐酸溶液，加入氯化钙溶液及硼酸缓冲液，再加水，调节pH，最后加入结晶胰蛋白酶进行活化，将溶液静置；

(6)结晶：将活化后的溶液调节pH，加入固体硫酸铵，搅拌溶解，静置，过滤，滤液加入固体硫酸铵，静置，过滤，得滤饼；滤饼中加入硼酸缓冲液，调节pH，搅拌均匀，再将溶液装透析袋，浸于外透液中；

(7)透析：过滤得结晶物，加水溶解，调节pH；将溶液透析，去除杂质；

(8)冻干：取出透析液，抽滤，得滤液，调节pH，冻干后得结晶胰蛋白酶成品。

3.根据权利要求2所述的一种胰蛋白酶精品的生产工艺，其特征在于，步骤(1)中，所述动物胰脏为新鲜的牛胰脏、新鲜的猪胰脏；硫酸溶液的浓度为0.1～0.2mol／L；胰浆与硫酸溶液的重量比为1：2～1：3；浸渍时间是20～28小时。

4.根据权利要求2所述的一种胰蛋白酶精品的生产工艺，其特征在于，所述步骤(2)中，水与滤饼的重量比为1：1～3：1；调节pH值至4.0～6.0；加入的饱和硫酸铵溶液与滤饼的重量比为1：10～1：1。

5.根据权利要求2所述的一种胰蛋白酶精品的生产工艺，其特征在于，所述步骤(3)中溶解静置环境温度为20～30℃；调节pH值至2.0～5.0；每1000ml溶液中加入固体硫酸铵的重量为300～400g。

6.根据权利要求2所述的一种胰蛋白酶精品的生产工艺，其特征在于，步骤(4)中，胰蛋白酶粗品与水的重量比为1：2-1：4，调节pH至3.0±0.5，搅拌10～16小时；每升溶液加入400～500g固体硫酸铵，待其溶解后，静置沉淀10～16小时。

7.根据权利要求2所述的一种胰蛋白酶精品的生产工艺，其特征在于，步骤(5)中，称滤饼重量，加0.001～0.01mol／L盐酸溶液将滤饼溶解，加入0.5～2mol／L氯化钙溶液，以及pH7.5～8.5的硼酸缓冲液，再加入水，调节pH7.0～8.0，最后每克滤饼加5～15mg的结晶胰蛋白酶进行活化处理，pH值控制在7.0～8.0；所述盐酸溶液的加入量为滤饼重量的3～5倍，所述氯化钙溶液的加入量为滤饼重量的1～3倍，所述硼酸缓冲液的加入量为滤饼重量的4～6倍。

8.根据权利要求2所述的一种胰蛋白酶精品的生产工艺，其特征在于，步骤(6)中，活化后的溶液调节pH至3.0±0.4，再按200～300g／L加入固体硫酸铵，搅拌溶解，在0～10℃中存放32～60小时使硫酸钙沉淀，过滤，滤液中按150～250g／L加入固体硫酸铵，0～10℃时放置10～14小时，过滤，得滤饼；按每克滤饼加入1～2mlpH8.0～10.0硼酸缓冲液，调节pH至8.0±0.4，搅拌均匀，再将溶液装透析袋，浸于外透液中，温度控制在0～10℃。

9.根据权利要求2所述的一种胰蛋白酶精品的生产工艺，其特征在于，步骤(7)中，按每克结晶物加入1～3ml水溶解，调节pH至3.0±0.5，温度控制在0～10℃，透析2～4天。

10.根据权利要求2所述的一种胰蛋白酶精品的生产工艺，其特征在于，步骤(8)中，调节pH至6.0±0.4。