[发明专利]一种脂肪乳剂及其制备方法及其应用及方法、以及一种血栓形成前状态动物模型

说明书

技术领域

本发明涉及动物实验领域，特别是指一种脂肪乳剂，本发明还涉及一种脂肪乳及的制备方法，本发明还涉及一种脂肪乳剂在建立家兔血栓形成前状态动物模型的应用及应用方法，本发明还涉及一种血栓形成前状态动物模型。 

背景技术

高血脂症及/或血栓形成被公认为是动脉粥样硬化（AS）的危险因子，但其致病机理非常复杂，有些方面还不是十分清楚，为了阐明其致病机理，血栓形成前状态（PST）动物模型的制作尤为重要，目前，动物实验中常采用高脂饲料喂养制备血栓形成前状态动物模型，该方法对于大、小鼠杂食性动物的制备效果尚可，但由于鼠类采血量极少，不能同时检测数个相关的指标，并且受到动物食性、剂量、周期等因素的影响，造成血栓形成前状态模型质量不稳定，且复制时间较长（达3-4个月），因而限制了其在制备动物模型中的应用；而采用高脂饲料喂养制备家兔血栓形成前状态动物模型可以避免这方面缺陷，可以从心脏一次取血达10ml，能够同时检测几个相关指标，但由于动物食性等因素造成剂量不容易准确投喂，并且喂养周期长，给实验带来一定的困难。 

发明内容

本发明的一个目的是提出一种脂肪乳剂，制备简单，成本低。 

本发明的另一个目的是提出一种脂肪乳剂的制备方法，过程简单，适合推广。 

本发明的另一目的是提出一种脂肪乳剂在建立家兔血栓形成前状态动物模型的应用及应用方法，过程简单，能够缩短建立时间，提高实验效率。 

本发明的另一个目的是提出一种血栓形成前状态动物模型，建立简单，满足实验的需求。 

本发明的技术方案是这样实现的：一种脂肪乳剂，包括：胆固醇、猪油、胆酸钠、丙基硫氧嘧啶、吐温80、丙二醇和水。 

优选的，所述脂肪乳剂中，主要组分的浓度为，胆固醇100g/L，猪油200g/L，胆酸钠20g/L，丙基硫氧嘧啶10g/L。 

所述脂肪乳剂的制备方法，包括以下步骤： 

a、取80份猪油至容器中，加热至融化； 

b、继续加入40份胆固醇并使之融化； 

c、继续加入8份胆酸钠和4份丙基硫氧嘧啶，搅匀； 

d、加入水、84-88份吐温80和83-84份丙二醇，搅匀； 

e、继续加入水至主要组分达到设定的浓度。 

所述脂肪乳剂的在建立家兔血栓形成前状态动物模型中的应用。 

所述脂肪乳剂在建立家兔血栓形成前状态动物模型的应用，包括以下步骤： 

1）家兔除给予普通饲料150g/只/天喂养外，还取所述脂肪乳剂按照2ml/kg·ｄ进行灌胃，每天一次，持续两周； 

2）灌胃前后分别从耳中央动脉6ml（采血前禁饮食12h），然后分别进行如下操作： 

2.1）取其中3ml用20g/L EDTA-Na2抗凝（抗凝剂：标本=1:9），2500r/min离心5min，取血浆低温冰箱保存，取部分红细胞测定：膜流动性（M-Flu）、E-MDA（红细胞-丙二醛）和E-SOD（红细胞超氧化物歧化酶）含量； 

2.2）将剩下的红细胞酶法测定M-TC含量； 

2.3）取血浆放兔法测定TXB₂、6-Keto-PGF₁、ET，酶联免疫吸附双抗体夹心法测定GMP-140，发色底物法测定t-PA、PAI； 

2.4）另采3ml直接离心测定血清酶法TC、TG、APOAI、APOB，免疫浊度法vWF， 

2.5）另取部分动脉血高效薄层层析法测定PAF含量； 

2.6）灌胃两周后处死动物做肉眼及光镜观察； 

3）将灌胃前后测定的各项指标进行对比和分析。 

其中，步骤2.1中，膜流动性（M-Flu）采用如下方法进行测定： 

用PBS洗涤红血球2次配成4*10⁷细胞/ml浓度的红细胞悬液，按照1:1与DPH（荧光探针）标记液混匀，于25℃保温30min，离心弃去标记残液，用PBS洗涤细胞2次，再用PBS稀释成2ml悬液，在25℃下采用荧光光度计分别测定与激发偏振光振动方向平行、垂直时荧光偏振强度，根据公式计算出M-Flu。 

其中，步骤2.2中，采用如下方法进行测定：