[发明专利]一种培养瓶及其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，特别是指一种培养瓶，本发明还涉及一种培养瓶的制备方法及应用。

背景技术

病原菌能引起多种感染和传染病，对病原菌进行准确的检测和鉴定可以为疾病的诊断、治疗及流行病调查提供有效的依据。随着抗菌药物的大量使用，导致出现大量严重耐药菌株以及新的病原微生物的出现，给临床诊断和治疗带来了极大的困扰，这也给病原微生物的检测和诊断提出来更高的要求。对血液样本进行细菌培养和检测是诊断血液感染类疾病的必须措施。由微生物侵犯血液引起败血症和菌血症是临床上的危急病症，死亡率高达29％。据权威资料统计，近20年来血液感染的发生率明显增加，已由上世纪70年代的6％上升至21世纪初期的13％，目前仍处于上升趋势。对于血液感染性疾病患者，能否有效治愈，很大程度上决定于快速、及时、准确的细菌培养检测报告。过去一直沿用传统手工培养检测方法，静态培养、肉眼观察，存在微生物生长差、培养时间过长（7天甚至更长）、阳性率检出低、准确性差、污染率高等缺点，往往延误冶疗，已不能适应现代临床医疗的需要。

血培养主要通过监测培养基中的浑浊度、pH值、代谢终产物CO₂的浓度、荧光标记底物或代谢产物等的变化，定性地检测微生物的存在。当前得到应用的血培养方法有以下几种，一是检测培养基的导电性和电压改变：血培养基中因含有不同电解质而具有一定导电性。微生物在生长代谢的过程中可产生质子、电子和各种带电荷的原子团（例如在液体培养基内CO₂转变成HCO₃^－），通过电极检测培养基的导电性或电压可判断有无微生物生长，这一方法需要采用较精密的电学仪器进行检测。二是测定培养瓶内压力变化：许多细菌生长过程中，常伴有吸收或产生气体现象，如很多需氧菌在胰酶消化大豆肉汤中生长时，由于消耗培养瓶中的氧气而首先表现为吸收气体，而厌氧菌生长时最初均无吸收气体现象，仅表现为产生气体（主要为CO₂），因此可利用培养瓶内压力的改变检测微生物的生长情况，这一方法也需要采用压力测试设备进行。三是采用光电原理监测培养基pH改变：微生物在代谢过程中必然会产生终代谢产物CO₂，引起培养基pH值及氧化还原电位改变。利用光电比色检测血培养瓶中某些代谢产物量的改变，可判断有无微生物生长，这一方法检测相对复杂。四是采用同源荧光技术来监测微生物的生长：与培养基结合的荧光分子在最初具有一定荧光值，当有微生物存在时，其生长代谢过程中或产生CO₂、或发生pH值改变、或氧化还原使电位改变等，均可导致液体培养基内的荧光分子结构发生改变而成为无荧光的化合物，即发生荧光衰减。通过光电比色计检测荧光衰减水平，可判断有无微生物生长，该方法同样需要采用昂贵的自动检测仪。

综上所述的几种方法，均在检测方式，或者检测精度，以及检测的及时性上等，都存在不少问题，因此亟待提出一种新方法来解决这些问题。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种基于荧光和化学传感膜技术的微生物培养瓶，既可以采用全自动检测仪进行检测，也可以通过目测来判断微生物生长，提高培养速度，灵敏度高、结构简单等。

本发明的另一个目的是提供一种基于荧光和化学传感膜技术的微生物培养瓶的制备方法，其制备方法简单，易于大规模生产。

本发明的另一个目的是提供一种培养瓶的应用。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种培养瓶，包括瓶体、瓶盖、胶塞；其中，所述瓶体内预分装有液体培养基，所述液体培养基中混悬有吸附树脂，所述瓶体内部底端贴敷一层传感膜，所述传感膜含有荧光指示剂及化学指示剂，当瓶内微生物的生长繁殖时，不仅能使所述传感膜发生颜色变化，而且发生荧光改变。

优选的是，所述液体培养基为需氧菌、厌氧菌和真菌培养所需的胰酶大豆肉汤或脑心浸液等培养成分，并添加适当微生物促生长因子，使细菌快速繁殖生长，便于快速检测。

优选的是，所述吸附树脂为一种或多种非离子吸附树脂和弱酸性阳离子树脂，将所述吸附树脂混悬于所述液体培养基中，用以快速地吸附检测样本中所含有的抗生素，降低抗生素对血培养的负面影响，提高阳性检出率。

优选的是，所述传感膜，为高分子半透膜，其只允许分子量为200以下的物质通过，避免非相关物质的干扰。

优选的是，所述化学传感膜，采用高分子硅橡胶材料制备。