[发明专利]一种稳定、高效适于双向电泳的放线杆菌蛋白提取方法

权利要求书

1.一种稳定、高效适于双向电泳的放线杆菌蛋白提取方法，其特征在于，操作步骤如下：

(1)取-80℃冷冻菌体，液氮研磨，准确称取0.05g粉末至2ml离心管中；

(2)往离心管中加入等量的蛋白提取液，所用蛋白提取液配方为：0.5M Tris-base，0.1M氯化钾，0.7M蔗糖，30mM盐酸，50mM DTT，50mM EDTA，40mMβ-二巯基乙醇；

(3)将上述溶液充分混匀后，恒温4℃超声震荡30min；

(4)13200r／min4℃离心30min，收集上清液，上清液中加入等量的pH8.0的苯酚溶液；

(5)4℃漩涡混悬15min，4℃13200r／min离心20min，收集酚相部分；

(6)将酚相部分转移到另一个新的离心管中，加入等量的蛋白提取液重复提取三次，每次均收集酚相部分；

(7)酚相中加入5倍体积的醋酸铵乙醇溶液-20℃过夜，13200r／min4℃条件下离心30min，收集蛋白沉淀；

(8)蛋白质沉淀用0.1M醋酸铵乙醇漂洗两次，然后再用-20℃丙酮漂洗一次，用真空冷冻离心干燥机处理蛋白沉淀，获得蛋白粉末，置-80℃冰箱中保存。

2.根据权利要求1所述的一种稳定、高效适于双向电泳的放线杆菌蛋白提取方法，其特征在于液氮研磨和超声震荡相结合，超声震荡时间为30min，功率为95W。

3.根据权利要求1或2所述的一种稳定、高效适于双向电泳的放线杆菌蛋白提取方法，其特征在于上清液中加入等量的pH8.0苯酚溶液。

4.根据权利要求1、2或3所述的一种稳定、高效适于双向电泳的放线杆菌蛋白提取方法，其特征在于酚相中加入5倍体积的醋酸铵乙醇溶液。