[发明专利]一种基于3D培养体系的扩增造血干细胞的方法

权利要求书

1.一种基于3D培养体系的造血干细胞扩增方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)将血液中分离出的造血干细胞悬液置入复合培养基中培养：复合培养基包括无血清干细胞基础培养基、SIFE生长因子、血清替代物、纤维蛋白凝胶；

(2)将(1)的复合培养基置入低氧培养箱中，低氧培养箱维持的氧浓度为3～20％。

2.根据权利要求1所述基于3D培养体系的造血干细胞扩增方法，其特征在于，步骤(1)复合培养基中，造血干细胞悬液的体积分数为15％、血清替代物的体积分数为15％、纤维蛋白凝胶的体积分数为15-25％、SIFE生长因子包括干细胞因子、FMS样酪氨酸激酶-3配体、促红细胞生成素、白细胞介素-3、白细胞介素-6、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子，各成份在复合培养基中的终浓度依次为50～100ng/mL、25～40ng/mL、0.5～1U/mL、3～5ng/mL、3～5ng/mL、3～5ng/mL、3～5ng/mL，佘量为无血清干细胞基础培养基。

3.根据权利要求1所述基于3D培养体系的造血干细胞扩增方法，其特征在于，步骤(1)纤维蛋白凝胶的制备方法为，①将氨基酸序列为mqaqqyqqqr rkfaaaflaf ifi laavdta eagkkekpek kvkksdcgew qwsvcvptsg dcglgtregt rtgaeckqtm ktqrckipcn wkkqfgaeck yqfqawgecd lntalktrtg的多肽与50-75mg冻干的纤维蛋白原偶联；②配制2000KIU/mL抑肽酶，取配制好的抑肽酶1mL溶解多肽偶联的冻干纤维蛋白原，即得溶液A，③将凝血酶加入40mmol/L CaCl₂溶液中，配制出凝血酶浓度为250-400u/mL的溶液B；④将溶液A和溶液B混合，在底面积为0.25cm²模具中制作成为圆柱形的复合物，置37℃保温1h，即得到纤维蛋白凝胶，4℃冰箱保存备用。

4.根据权利要求2所述基于3D培养体系的造血干细胞扩增方法，其特征在于，步骤(1)的30ul造血干细胞悬液中含有的造血干细胞个数为1-2×10⁵个。