[发明专利]一种高毒性、高增值能力的人D-CIK细胞的专用试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于细胞免疫学技术领域，具体地说是一种高毒性、高增值能力的人D-CIK细胞制备的专用试剂盒。

背景技术

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell，CIK)是Schmidt等于1986年报道的从外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中诱导出的一群异质性细胞。其主要效应细胞因同时表达CD3+和CD56+两种膜蛋白分子，因此又被称为NK细胞样T淋巴细胞(NKT细胞)。体内外的实验研究表明，CIK细胞具有杀瘤活性高、增值速度快、抗凋亡及杀瘤效应不受癌细胞多重耐药的影响等优势。

树突状细胞(dendritic cell，DC)是目前所知功能最强的抗原递呈细胞(antigen-presenting cell，APC)，表面具有丰富的有助于抗原呈递的分子，如主要组织相容性复合体I、II(major histocompatibility complex I/II，MHC I/II)、CD80/86、CD40、ICAM-I等共刺激分子，能有效的激活初始型T细胞( T cell)使其活化和增值，启动特异性免疫应答反应，发挥有效的抗肿瘤效应。

树突状细胞调节的细胞因子诱导的杀伤细胞(dendritic cell activated and cytokine induced killer cell，D-CIK)是指将成熟的DC与同源的CIK细胞同培养而形成的一群异质性细胞群。共培养既可以促进DC分泌IL-12，又可以促进CIK细胞的增值，并加强其抗肿瘤活性。等研究发现，IL-12摄取阻断会减弱CIK细胞的细胞毒活性。因此，D-CIK细胞应用于恶性肿瘤患者的治疗，有助于解除肿瘤患者体内T细胞的免疫无能，从而提高抗肿瘤活性。

现有CIK细胞制备技术中存在：(1)CIK细胞中绝大部分群体为CD3+CD8+T淋巴细胞，大约占CIK细胞的60％左右，然而其杀瘤活性却受到极大的限制；这与目前的CD3+CD8+T淋巴细胞，也即细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)是抗肿瘤的主要免疫效应细胞的认识存在差异。(2)虽然主要效应细胞——NKT细胞，扩增1000倍左右，但整体细胞群体扩增能力较为有限，大约80～100倍左右。DC制备技术中存在，成熟DC分泌IL-12因子的水平偏低。二者共培养后，增值能力和细胞毒活性提高不显著等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够培养出以CD3+CD8+T淋巴细胞为主效应细胞的人D-CIK细胞制备的专用试剂盒。

本发明所提供的一种能够培养出以CD3+CD8+T淋巴细胞为主要效应细胞的人D-CIK细胞制备的专用试剂盒，该试剂盒由单核细胞分离获取培养基、促DC诱导分化培养基、促DC成熟剂、肿瘤抗原、强化细胞毒活性培养基、细胞激活增值培养基、CD3+CD8+T淋巴细胞诱导分化培养基、细胞扩增培养基组成。

作为优选，所述单核细胞分离获取培养基为PAA^TM培养基、GT-T551^TM培养基、Opti-MEM^TM培养基、RPMI-1640培养基中的任意一种。

作为优选，所述促DC诱导分化培养基的溶剂为X-VIVO-15^TM培养基或者AIM-V^TM培养基中任意一种，溶质为GM-CSF和IL-4，其中GM-CSF的浓度是800-1000IU/ml，IL-4的浓度是800-1000IU/ml。

进一步地，所述促DC诱导分化培养基的GM-CSF的浓度是800IU/ml，IL-4的浓度是1000IU/ml。

作为优选，所述促DC成熟剂的溶剂为X-VIVO-15^TM培养基或者AIM-V^TM培养基中任意一种，溶质为IL-1β、IL-6、TNF-α，或者IL-1β、IL-6、TNF-α与IFN-γ、Mtb-Hag中的一种或者两种，该促DC成熟剂加入到培养体系后，IL-1β终浓度为8-15ng/mL，IL-6终浓度为50-150ng/mL，TNF-α终浓度为8-15ng/mL，Mtb-Hag终浓度为5～10μg/ml，IFN-γ终浓度为100～1000IU/ml。