[发明专利]克隆禽α-干扰素的通用引物及其应用

权利要求书

1.用于克隆禽类IFN-α基因的简并引物，由一条上游简并引物和一条下游简并引物组成，其特征在于，所述的上游简并引物的核苷酸序列为：5’-CASCRSYACRBCCASCASCTCSAGC-3’，所述的下游简并引物的核苷酸序列为：5’-AGGMGGACGRGKTCCCASGCGCAG-3’，其中R=A/G，Y=C/T，M=A/C，K=G/T，S=C/G，B=C/G/T。

2.如权利要求1所述的用于克隆禽IFN-α基因的简并引物，其特征在于，所述的禽类包括鸡、鸭、鹅、孔雀以及丹顶鹤。

3.用于克隆禽类IFN-α基因的简并引物，由一条上游简并引物和一条下游简并引物组成，其特征在于，所述的上游简并引物的核苷酸序列为：5’-CYRSYSCTCNYGCTCCTYCT-3’，所述的下游简并引物的核苷酸序列为：5’-AGGMGGACGRGKTCCCASGCGCAG-3’，其中R=A/G，Y=C/T，M=A/C，K=G/T，S=C/G，N=A/C/G/T。

4.如权利要求1所述的用于克隆禽IFN-α基因的简并引物，其特征在于，所述的禽类包括鸡、鸭、鹅、孔雀以及丹顶鹤。

5.一种用于克隆禽类IFN-α基因的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）按照禽类血液基因组DNA的简单快速提取方法，分别从家禽的血液中提取基因组DNA；

（2）分别以提取得到基因组DNA为模版，以权利要求1或权利要求3所述的简并引物为引物，PCR扩增IFN-α基因；

（3）回收目的片段，将胶回收产物连入载体，转化到感受态细胞中培养；

（3）挑取单克隆菌落，经菌液PCR鉴定阳性后进行测序；

（4）根据测序结果，通过常规的基因组步移的方法获得禽类IFN-α的全长基因序列。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于当使用权利要求1所述的简并引物为引物，PCR扩增IFN-α基因时，其反应条件为：94℃预变性8min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃终延伸10min，4℃终止反应；当使用权利要求3所述的简并引物为引物，PCR扩增IFN-α基因时，其反应条件为：94℃预变性8min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环；72℃终延伸10min，4℃终止反应。

7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述的禽类包括鸡、鸭、鹅、孔雀以及丹顶鹤。

8.权利要求1或2所述的用于克隆禽类IFN-α基因的简并引物在禽类IFN-α基因克隆、鉴定和筛选中的应用。

9.权利要求3或4所述的用于克隆禽类IFN-α基因的简并引物在禽类IFN-α基因克隆、鉴定和筛选中的应用。