[发明专利]一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种胶体金膜，尤其涉及一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜，适用于检测敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调以及质控抗体和捕获抗体是否被相互污染。此外，本发明还涉及该胶体金膜的制备方法和应用。

背景技术

将质控抗体、捕获抗体包被到硝酸纤维素膜上生产敏化硝酸纤维素膜是免疫层析试纸条生产制作中的关键环节之一。目前的喷膜技术即将抗体包被到硝酸纤维素膜上，分为两种，一种是接触划点工艺，即在接触喷点系统中，喷头划过硝酸纤维素膜表面，同时泵推动一定量的液体从喷头处释放到硝酸纤维素膜表面上；另一种是喷点工艺，使用电磁阀连接高精度步进泵，将喷点液体喷点到硝酸纤维素膜上且以紧密的交迭点构成连续的线条，喷点过程与成像系统连接，能检查喷点线条的质量同时标记任何不好的部分。这两种工艺均能够将质控抗体和捕获抗体分别均匀地喷点在硝酸纤维素膜上指定区域（分别为质控线区域、检测线区域）。

由于目前的喷膜技术均无法区分质控抗体和捕获抗体，不能够确定质控抗体和捕获抗体位置对调或者检测两种抗体之间相互污染（例如，因喷膜抗体与捕获抗体配制/使用时混料而导致的抗体污染），从而导致整批敏化硝酸纤维素膜报废。

因此，亟需开发一种可用于快速检测敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调以及质控抗体和捕获抗体是否被相互污染的新产品。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的技术问题之一是提供一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜，用于检测敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调和两种抗体是否被相互污染。

本发明要解决的技术问题之二是提供该胶体金膜的制备方法。

本发明要解决的技术问题之三是提供该胶体金膜在敏化硝酸纤维素膜检测中的应用。

为解决上述技术问题，在本发明的一方面，提供一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜，该敏化硝酸纤维素膜上设有包被质控抗体的质控线和包被捕获抗体的检测线，该胶体金膜包括含有胶体金探针的金标垫以及配套使用的PVC胶板、滤样纸和金探针复溶液。在PVC胶板上依次叠合有滤样纸，含有胶体金探针的金标垫，以及待检敏化硝酸纤维素膜；金探针复溶液滴加在滤样纸上。

作为优选的技术方案，所述金标垫是包被金探针的玻璃纤维。所述含有胶体金探针的金标垫为兔抗体金标垫或羊抗鼠抗体金标垫；所述兔抗体金标垫是兔多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上，所述羊抗鼠抗体金标垫是羊抗鼠多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上。

作为优选的技术方案，所述金探针是偶联抗体的胶体金颗粒，即所述胶体金探针采用胶体金颗粒与抗体分子通过物理吸附的作用偶联结合。

作为优选的技术方案，所述胶体金颗粒的直径范围是20-60nm。

作为优选的技术方案，所述抗体分子是兔多克隆抗体或羊抗鼠多克隆抗体。即所述兔抗体胶体金膜包括包被兔多克隆抗体标记的金探针的金标垫以及配套使用的PVC胶板、滤样纸和金探针复溶液。所述羊抗鼠抗体胶体金膜包括包被羊抗鼠多克隆抗体标记的金探针的金标垫以及配套使用的PVC胶板、滤样纸和金探针复溶液。

作为优选的技术方案，所述金探针复溶液包括以下组分（质量百分比）：

Triton X-100    0.05%；

NaH₂PO₄·2H₂O    0.38%；

Na₂HPO₄·12H₂O   2.95%；

该金探针复溶液的pH=8.0±0.1。

在本发明的另一方面，提供一种上述胶体金膜的制备方法，包括如下步骤：

（1）胶体金颗粒的制备；

（2）金探针复溶液的配制；

（3）金探针的制备：取胶体金溶液，用0.1M碳酸钾溶液调整其PH为8.0-8.4，加入抗体，继续搅拌30分钟，加入终浓度为1%的牛血清白蛋白，继续搅拌30分钟，4℃11000RTC转速离心，弃上清，沉淀用金探针复溶液重悬，2-8℃保存备用；

（4）金探针稀释液的配制；

（5）金标垫溶液的配制；测量上述步骤（3）制备的胶体金探针OD530值，用金探针稀释液稀释至OD530为1-2；

（6）金标垫的制备：将30cm长的玻璃纤维浸泡在上述步骤（5）制备的金标垫溶液中，待玻璃纤维完全湿润后取出，37℃烘干后室温密封保存备用；