[发明专利]一种激活素A促进原始卵泡库形成的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种激活素A（Activin A）促进雌性生殖细胞第一次减数分裂进程的方法，从而促进哺乳动物原始卵泡库的建立，特别是涉及一种激活素A促进原始卵泡库形成的方法。属于生殖医学的生物医学技术领域。 

背景技术：

随着全球工业化的急剧发展和环境污染的持续加重，不孕不育夫妇的比例逐渐增加，胎儿出生缺陷发生率居高不下。我国女性不孕不育、卵巢早衰及先天出生缺陷等疾病发生率也呈现逐渐升高的趋势。研究者对不孕不育和先天出生缺陷的发病原因进行了大量的探索研究后发现，这些卵巢性生殖疾病发生的主要原因之一是卵子发生过程中减数分裂发生或染色体分离异常从而导致原始卵泡库中卵母细胞的数目降低。然而，最初人们主要关注出生后卵泡的生长、发育与成熟，而对减数分裂启动以及原始卵泡形成的调控机制还了解很少。另外，原始卵泡形成的数量及其消耗的效率决定了雌性动物的繁殖使用时间的长短。因此，为了尽早地启动动物繁殖周期、开发最大量的原始卵泡或推迟女性更年期的来临、治疗卵巢功能性不育，研究卵母细胞发生过程中减数分裂启动、原始卵泡形成和募集显得非常重要。 

激活素A是TGF-β超家族成员，在哺乳动物卵子发生过程中发挥着重要的作用，在不同时间调节多种细胞中相关基因的表达。近年的研究主要集中在激活素A调节卵泡颗粒细胞增殖，激活素A可刺激卵巢颗粒细胞增生和成熟，用己烯雌酚处理未成熟大鼠颗粒细胞表明，激活素A可增强FSH（促卵泡素），刺激芳香酶的活性，促进孕酮及抑制素的产生（Eppig et al,1994）。用激活素A处理卵巢碎片可刺激卵原细胞的增殖（Martins da et al,2004）等。目前，在激活素Ａ参与调节减数分裂前生殖细胞形成原始卵泡库方面还未有研究报道。本研究借助胎鼠生殖嵴体外发育模型，深入研究激活素A与雌性生殖细胞原始卵泡库形成之间的关系，具有很大的实际应用价值。 

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种激活素A促进原始卵泡库形成的方法，使激活素A在体内和体外条件下都可以促进动物原始卵泡库的形成。 

为了实现上述发明目的，本发明方法利用免疫组织化学、定量PCR及蛋白印迹技术检测了激活素A的Ⅰ型和Ⅱ型受体在12.5dpc、0dpp、7dpp、14dpp和21dpp小鼠卵巢发育过程中的定位和表达变化，结果显示激活素A的Ⅰ型和Ⅱ型受体在12.5dpc到7dpp小鼠卵巢中有明显的表达峰；再利用12.5dpc雌性胎鼠生殖嵴体外培养，在12.5dpc到7dpp期间持续添加激活素A显著提高卵母细胞数量、直径和质量(P<0.05)；在12.5dpc雌性胎鼠生殖嵴 体外培养过程中，激活素A可促进卵母细胞第一次减数分裂前期的进程（P<0.05)，使减数分裂相关基因Stra8、Dazl、Dmc1和Scp3在基因水平表达量显著升高（P<0.05），Stra8、Scp3和Dazl蛋白表达量显著升高(P<0.05)。对妊娠第10d的母鼠静脉注射激活素A，激活素A促进卵原细胞第一次减数分裂前期进程，减数分裂相关基因表达量也显著升高（P<0.05）。12.5dpc小鼠卵巢体外培养10天后，激活素A促进生殖细胞Cyst的解聚和原始卵泡形成。 

本发明的一种激活素A促进原始卵泡库形成的方法，按照如下步骤操作：