[发明专利]猪葡萄球菌脱落毒素分型的多重荧光PCR检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种猪葡萄球菌脱落毒素分型的多重荧光PCR检测引物组，其特征在于包括用于检测EXHA、EXHB、EXHC及EXHD的4组引物和4条Taqman探针；

所述的4组引物如SEQ ID NO：1～8所示；

所述的Taqman探针由5’端带有的荧光物质，Taqman探针的序列和3’端带有的淬灭物质组成；

所述的4条Taqman探针的序列如SEQ ID NO：9～12所示。

2.根据权利要求1所述的猪葡萄球菌脱落毒素分型的多重荧光PCR检测引物组，其特征在于：所述的5’端带有的荧光物质为FAM、JOE、TAMRA、Cy5中的至少一种；

所述的3’端带有的淬灭物质为BHQ、BHQ1、BHQ2和BHQ3中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的猪葡萄球菌脱落毒素分型的多重荧光PCR检测引物组，其特征在于：所述的4条Taqman探针如下：

4.一种猪葡萄球菌脱落毒素分型的多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于包括权利要求1所述的检测EXHA、EXHB、EXHC及EXHD的4组引物和4条Taqman探针。

5.根据权利要求4所述的猪葡萄球菌脱落毒素分型的多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：试剂盒具有由以下成分组成：权利要求1所述的检测EXHA、EXHB、EXHC及EXHD的4组引物和4条Taqman探针；DNA聚合酶；DNA聚合酶缓冲液；dNTP和水。

6.根据权利要求5所述的猪葡萄球菌脱落毒素分型的多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的DNA聚合酶、DNA聚合酶缓冲液和dNTP为Premix Ex Taq试剂盒中的Premix溶液。

7.权利要求4～6任一项所述的检测试剂盒检测猪葡萄球菌脱落毒素分型的多重荧光PCR方法，具体步骤如下：

（1）提取待测样品的DNA模板；

（2）配制PCR反应体系：步骤（1）待测样品DNA模板2μL；4组引物中各条引物的量为5-15pmol；4条Taqman探针中各种探针的量为2-10pmol；Premix溶液10μL，加水至总体积为20μL；

（3）将上述步骤（2）中配制的PCR反应体系置于荧光定量PCR仪中反应，反应条件如下：95℃30秒；热循环为95℃1秒，60℃20秒，共40个循环；

（4）通过荧光探针上所携带的荧光染料的颜色对应的扩增曲线的CT值判断，是否存在EXHA、EXHB、EXHC及EXHD，及存在的量的多少。