[发明专利]金黄色葡萄球菌HI重组蛋白的发酵和纯化工艺

权利要求书

1.一种HI重组蛋白基因工程菌的发酵工艺，包括将一定量的种子菌接种于含有甘油和一定溶氧量的培养基中，经诱导剂诱导一定时间而表达重组蛋白。 

2.根据权利要求1所述的工艺，其中，所述培养基是动物源性TB、动物源性M9、植物源性TB或植物源性M9。 

3.根据权利要求1所述的工艺，其中，所述种子菌的接种量是5%～15%，优选为10%。 

4.根据权利要求1所述的工艺，其中，所述甘油量为5-15ml/L培养基，优选为10ml/L培养基。 

5.根据权利要求1所述的工艺，其中，所述溶氧量是25%～65%，优选为45%。 

6.根据权利要求1所述的工艺，其中，所述诱导剂可以是乳糖或IPTG，所述诱导剂的浓度是0.1～1mM，优选为0.2mM；诱导温度为16～37℃，优选为30℃；诱导时间为1～6小时，优选为5小时。 

7.根据权利要求1-6任一项所述的工艺，其中，所述工程菌是含有能够表达HI蛋白的大肠杆菌；优选地，所述大肠杆菌是XL-1Blue；所述载体是pGEX-6p-2。 

8.一种在如权利要求1-7任一项所述的HI重组蛋白工程菌发酵工艺之后纯化HI重组蛋白工艺，包括依次进行的GST-琼脂糖凝胶4B亲和层析、阳离子交换层析、置换缓冲液及去内毒素。 

9.根据权利要求8所述的工艺，其中，所述阳离子交换层析使用MMC层析柱，使用的缓冲液为，缓冲液A:25mM NaAC-HAC，pH4.5，缓冲液B:50mM PB+1M NH₄Cl，pH7.0；上样流速为4.7ml/min，洗脱流速：4.7ml/min；洗脱程序：0-100%B，20个柱体积（CV）；优选地，上样pH值为7.0-7.5，洗脱pH值为11.0；所述置换缓冲液使用G25层析柱，使用缓冲液为疫苗稀释液；所述去内毒素使用Q HP层析柱，使用缓冲液为，缓冲液A：疫苗稀释液，缓冲液B:1M NaOH。 

10.根据权利要求8或9所述工艺，在纯化之前，对HI工程菌进行菌体破碎，以将重组蛋白从菌体中释放出来。