[发明专利]一种金黄色葡萄球菌疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种金黄色葡萄球菌疫苗制剂及其制备方法。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)，以下简称金葡菌，有“嗜肉菌”的别称。作为革兰氏阳性菌的代表，它是引起医院感染和社区感染的一种重要致病菌。感染以急性、化脓性炎症为特征，局部感染可引起皮肤和软组织等的化脓性感染，经久不愈；全身感染可导致骨髓炎、脓毒性关节炎、心内膜炎、肺炎、脓毒血症等严重感染及并发症，死亡率高达20％。同时，金葡菌的外毒素还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征和中毒性休克综合征等全身致死性感染。

随着抗生素长期、广泛地使用，细菌耐药性问题日益突出，作为典型代表的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)自1961年首次被发现以来，已成为全球ICU病房、术后感染、烧伤、战创伤等感染率最高的医院内感染病原菌之一。同时，因其致病性强、传播途径广泛、易暴发流行且呈多重耐药性发展而成为临床上治疗的难点，又被称为“第一超级细菌”。

据美国CDC报道，美国平均每年MRSA严重感染人数约为9万人，致死病例约为2万人。中国2011年全国细菌耐药监测报告显示：临床MRSA检出率平均为60%，广泛耐药率超过40%。当前MRSA已与乙型肝炎、AIDS被列为世界三大最难解决的感染性疾病，并位居首位。万古霉素是目前治疗MRSA感染的最后一道防线，但1997年以来耐万古霉素的MRSA菌株相继出现，并在全球呈蔓延趋势，使MRSA感染面临“无药可治”的严峻挑战。

针对耐药金葡菌感染的严峻挑战，WHO于2011年提出“抵抗耐药菌”的“六点政策一揽子计划”，并强调未来重点支持创新性疫苗等免疫防控制品的研发。因此，加强对金葡菌感染的免疫防治研究，研制安全、有效的新型金葡菌基因工程疫苗将对有效控制金葡菌耐药性蔓延和临床金葡菌广泛感染具有重要的战略及现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的金黄色葡萄球菌疫苗制剂，用于预防和治疗金黄色葡萄球菌感染及因此引发的脓毒血症等相关感染性疾病。

在第一个方面，本发明的疫苗制剂包括SpA5蛋白，所述SpA5蛋白的序列选自SEQ ID NO.1～4任一条序列。

优选地，所述疫苗制剂还包括MntC、mSEB和HI蛋白中的一种或多种。

在另一方面，本发明提供一种制备发明的疫苗制剂的方法，包括：将铝佐剂与疫苗抗原蛋白分开稀释后再混合和/或吸附。

本发明的疫苗制剂免疫原性强，活性高，能够有效刺激机体产生高效的保护性免疫应答和良好的免疫保护作用，从而抵御金黄色葡萄球菌感染。本发明的制备方法保证了疫苗抗原四种组分的吸附均一性和稳定性，提高了生产效率，降低了生产成本。

附图说明

图1、为实施例4中SDS-PAGE结果；M：蛋白质分子量标准；1：为实施例4中所配制不含磷酸铝佐剂的同浓度蛋白原液样品；2：为实施例1成品离心沉淀解离后取样样品；3：为实施例1成品离心后上清取样样品；4：为实施例2成品离心沉淀解离后取样样品；5：为实施例2成品离心后上清取样样品；6：为实施例3成品离心沉淀解离后取样样品；7：为实施例3成品离心后上清取样样品。

图2、为实施例6中SDS-PAGE结果；M：蛋白质分子量标准；1：80μgHI蛋白样品；2：120μg HI蛋白样品；3：160μg HI蛋白样品；4：SpA5（KKAA）不含佐剂样品；5：80μgSpA5（KKAA）样品；6：120μg SpA5（KKAA）样品；7：160μg SpA5（KKAA）样品。

图3、为实施例6中SDS-PAGE结果；M：蛋白质分子量标准；1：mSEB蛋白不含佐剂样品；2：80μg mSEB蛋白样品；3：80μg mSEB蛋白样品；4：160μg mSEB蛋白样品；5：MntC蛋白不含佐剂样品；6：80μg MntC蛋白样品；7：120μg MntC蛋白样品；8：160μgMntC蛋白样品。

图4、为实施例7中SDS-PAGE结果；M：为蛋白质分子量标准；1：随机取样1-离心上清取样样品；2：随机取样1-离心沉淀解离后取样样品；3：随机取样2-离心上清取样样品；4：随机取样2-离心沉淀解离后取样样品；5：随机取样3-离心上清取样样品；6：随机取样3-离心沉淀解离后取样样品。