[发明专利]一种检测清热灵颗粒中黄芩苷、连翘苷、靛玉红和甘草酸含量的方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种中药制剂的含量测定方法，具体涉及一种检测清热灵颗粒中黄芩苷、连翘苷、靛玉红和甘草酸含量的方法。

（二）背景技术

清热灵颗粒的处方组成为黄芩250g、连翘250g、大青叶250g、甘草50g。其制法以上四味药加水煎煮二次，每次1.5小时，合并滤液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.20～1.25（80℃）的清膏，放冷，加入乙醇使含醇量达58%～60%，静置12小时以上，取上清液滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.29～1.31（80℃）的稠膏，加蔗糖粉740g及适量糊精，制成颗粒，干燥，制成1000g；或加入甜菊素6.66g及适量的糊精制成颗粒，干燥，制成333g，即得。本品为棕黄色至黄棕色的颗粒，味甜、微苦。功能与主治为：清热解毒。用于感冒热邪壅肺证，症见发热、咽喉肿痛。

清热灵颗粒在《中华人民共和国药典》2010年版一部中含量测定项下只是测定了黄芩中的黄芩苷这一个成分，难以反应出整个药品的质量，有一定的不足。

（三）发明内容

本发明针对目前清热灵颗粒含量测定方法的不足，提供了一种更加合理有效的含量测定方法用于产品的质量控制，在测定黄芩中黄芩苷含量的基础上，增加测定连翘中连翘苷含量，大青叶中靛玉红含量和甘草中的甘草酸含量。

本发明采用高效液相色谱法，在同一色谱条件下，采用流动相梯度洗脱，使用DAD紫外检测器，在不同波长处同时测定黄芩苷、连翘苷、靛玉红和甘草酸含量。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种检测清热灵颗粒中黄芩苷、连翘苷、靛玉红和甘草酸含量的方法，所述方法包括以下步骤：

（1）制备待测样品：将清热灵颗粒研细混匀后加入体积浓度0～100%乙醇水溶液a中，制成混合液a，将混合液a在超声频率25KHz、超声功率80～100W的条件下超声处理10～30分钟，冷却后取超声处理后的混合液a加入体积浓度0～100%乙醇水溶液b补足重量，制成混合液b，使混合液b与混合液a的质量相同，将混合液b摇匀、过滤，取滤液，获得待测样品；所述乙醇水溶液b与乙醇水溶液a的体积浓度相同；

（2）含量测定：将步骤（1）制备的待测样品注入高效液相色谱仪进行检测，获得待测样品的高效液相色谱图；将黄芩苷标准品用体积浓度0～100%乙醇水溶液配制成黄芩苷标准品溶液，取不同体积的黄芩苷标准品溶液与待测样品相同的条件下进行入高效液相色谱检测，获得黄芩苷标准品溶液的高效液相色谱图，以黄芩苷标准品溶液的高效液相色谱图中吸收峰的峰面积为横坐标，以黄芩苷准品溶液进样量为纵坐标制作黄芩苷标准曲线，按同样方法制作连翘苷标准曲线、靛玉红标准曲线和甘草酸铵标准曲线；根据待测样品的高效液相色谱图中相应吸收峰的峰面积及各个标准品的标准曲线计算待测样品中黄芩苷、连翘苷、靛玉红和甘草酸含量，其中甘草酸的重量=甘草酸铵重量/1.0207，相应换算得到清热灵颗粒中黄芩苷、连翘苷、靛玉红和甘草酸含量；高效液相色谱仪测试条件为：色谱柱以苯基键合硅胶为填充剂，以体积浓度0.5%冰乙酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为0～20min时流动相A的体积分数为80～72%，20～35min时流动相A的体积分数为72～57%，35～50min时流动相A的体积分数为57%，DAD紫外检测器，分别同时在280nm、277nm、289nm和252nm处检测吸收峰。

进一步，所述步骤（1）中，所述乙醇水溶液a优选为体积浓度50%乙醇水溶液或70%乙醇水溶液，乙醇水溶液b优选为体积浓度50%乙醇水溶液或70%乙醇水溶液，乙醇水溶液b与乙醇水溶液a的体积浓度相同。

进一步，所述步骤（1）中，超声处理时间优选为20～30分钟。

所述步骤（1）中，混合液a或混合液b的质量通常以清热灵颗粒的质量计为5～15mL/g，优选8～10mL/g。

进一步，所述步骤（2）中，所述色谱柱中填充剂的粒径优选为5μm。

进一步，所述步骤（2）中，所述色谱柱长优选为250mm，内径优选为4.6mm。

进一步，所述步骤（2）中，洗脱剂的流速优选为1.0ml/min。

所述步骤（2）中，梯度洗脱时，流动相A的体积分数是指流动相A相对于流动相A与流动相B的总体积的体积分数。

所述步骤（2）中，0～20min时流动相A的体积分数为80～72%，是指起始时，流动相A的体积分数为80%，设定0至20min，流动相A的体积分数从80%线性下降至72%。