[发明专利]基于EST-SSR标记鉴定枇杷品种的方法

权利要求书

1.一种基于EST-SSR标记鉴定枇杷品种的方法，其特征在于：所用来鉴定枇杷品种的引物是通过针对枇杷EST序列设计的SSR引物，经3次筛选出条带清晰、多态性好的引物，具体包括：

2.根据权利要求1所述的基于EST-SSR标记鉴定枇杷品种的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

(1)提取需要进行鉴定、区分的枇杷DNA，稀释备用；

(2)利用引物EJ-38对枇杷DNA进行PCR扩增并进行PAGE凝胶检测，在223bp、227bp都出现特征性谱带，而245bp无特征性谱带，1.‘大五星’、13.‘六分种’、17.‘尖头大红袍’三个枇杷品种被分成A组；在227bp、245bp都出现特征性谱带，在223bp无特征性谱带，3.‘宁海白’、4.‘溪上白沙’、6.‘荸荠种’、7.‘冠玉’、10.‘白玉’、14.‘白毛五儿’六个枇杷品种被分为B组；在223bp、227bp都无特征性谱带，只在245bp出现特征性谱带，编号为5.‘洛阳青’、9.‘青种’、11.‘甜种’、15.‘大玫瑰红袍’、18.‘宝珠’五个枇杷品种被分成C组；在223bp、245bp都无特征性谱带，只在227bp出现特征性谱带，编号为8.‘鸡蛋白’、16.‘大叶杨墩’两个枇杷品种被分成D组；在223bp、227bp、245bp都无特征性谱带，编号为2.‘大房’12.‘迟红’两个枇杷品种被分成E组，并进入步骤(3)；

(3)进一步利用引物EJ-25进行PCR扩增并进行PAGE凝胶检测，根据在160bp、210bp、216bp和220bp出现的特征性谱带区分A、B、C、D、E五组中的枇杷品种：

在A组中，在160bp处无特征带、而在210bp处出现特征性谱带则品种1.‘大五星’被区分出来；若在160bp、220bp都出现特征性谱带则品种13.‘六分种’被区分出来；在160bp、210bp都出现特征性谱带则品种17.‘尖头大红袍’被区分出来；

在B组中，在216bp都出现特征性谱带，则品种7.‘冠玉’被区分出来，而3.‘宁海白’、4.‘溪上白沙’、6.‘荸荠种’、10.‘白玉’、14.‘白毛五儿’五个品种在216bp无特征性谱带，进入步骤(4)；

在C组中，在220bp有特征性谱带，在160bp处无特征带，品种11.‘甜种’被区分鉴定出来；而在210bp有特征性谱带，在160bp处无特征带，品种18.‘宝珠’被鉴定出，其余三个品种5.‘洛阳青’、9.‘青种’、15.‘大玫瑰红袍’仅在160bp有特征带，则进入步骤(4)；

在D组中，在160bp处无特征带，品种8.‘鸡蛋白’被区分鉴定出来；而在160bp处有特征性谱带的，品种16.‘大叶杨墩’则被区分出来；

在E组中，在210bp无特征性谱带，品种2.‘大房’被区分鉴定出来；而在210bp处有特征性谱带的，品种12.‘迟红’被鉴定出来；

(4)利用引物EJ-20进行PCR扩增，并进行PAGE凝胶检测，

在B组中，在200bp处出现特征性谱带，品种3.‘宁海白’、6.‘荸荠种’、14.‘白毛五儿’三个品种被分为一组；品种4.‘溪上白沙’和10.‘白玉’在200bp处无特征性谱带，被分为另一组，继续进入步骤(5)；

在C组中，在200bp有特征性谱带，品种15.‘大玫瑰红袍’被鉴定出来，而品种5.‘洛阳青’和9.‘青种’则进入步骤(5)；

(5)利用引物EJ-16和EJ-40分别进行PCR扩增，并进行PAGE凝胶检测，

在B组中，利用引物EJ-40对品种3.‘宁海白’、6.‘荸荠种’、14.‘白毛五儿’三个品种进行扩增并检测，在236bp、238bp处均出现特征性谱带的，品种3.‘宁海白’被鉴定出来；仅在236bp处出现特征性谱带，而在238bp处无特异谱带的为品种14.‘白毛五儿’；仅在238bp处出现特征性谱带，而在236bp处无特异谱带的为品种6.‘荸荠种’；

利用引物EJ-16对品种4.‘溪上白沙’和10.‘白玉’进行扩增并PAGE检测，在172bp处出现特征性谱带的，为品种4.‘溪上白沙’；而无该特异条带的则为品种10.‘白玉’，至此B组所有枇杷品种都被鉴定出来；

在C组中，利用引物EJ-16对品种5.‘洛阳青’和9.‘青种’扩增并进行PAGE检测，在172bp处出现特征性谱带的，为品种9.‘青种’；而无该特异条带的则为品种5.‘洛阳青’，至此C组所有枇杷品种也都被鉴定出来。