[发明专利]基于EST-SSR标记鉴定枇杷品种的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学分子标记领域，具体地说涉及一种基于EST-SSR标记鉴定枇杷品种的方法。

背景技术

枇杷(Eriobotrya japonica Lindl，2n=2x=34)系蔷薇科(Rosaceae)苹果亚科(Maloideae)枇杷属植物，在我国亚热带地区和亚洲其他国家有着广泛的种植。枇杷起源于我国的东南部(Lin and Hu，2000)，在我国已有两千多年的栽培历史，种质资源丰富。枇杷属亚热带常绿果树，根据果实的特点，枇杷可分为红沙和白沙品种(Fu et al.，2012)；成熟的枇杷果实多呈球形或椭圆形，柔软多汁，富含谷氨酸，酚类物质(尤其是黄酮类化合物)，维生素和类胡萝卜素等营养成分，是重要的保健果品(Cao et al.，2009；Fu et al.，2011)。枇杷果实除鲜食外，还是加工罐头、果酱、果膏、果冻和果酒的好原料。

由于近年来枇杷产业的不断发展和壮大，枇杷品种的新优品种的推广和深入，以及资源环境的破坏，枇杷品种有朝单一性方面发展的趋势，资源保存中经常发生的资源混淆的情况，种质资源研究的重要性也引起越来越多人的重视。因此，建立枇杷品种快速可靠的鉴定技术体系对于枇杷品种资源的有效利用与保护及枇杷产业的持续发展具有重要的意义。

目前传统单一的形态学品种鉴定方法已经无法满足有效区分或鉴别众多的品种的要求。分子标记的产生突破了遗传学研究的瓶颈，克服了传统的形态标记、细胞学标记和生化标记易受外界因素，具有不可比拟的优势。在常用的RAPD、RFLP、SSR、AFLP等分子标记技术中，SSR标记因具有简单性，高度的多态性，共显性的，效率高等优点被广泛应用于植物品种鉴定，遗传连锁图谱，遗传多样性分析及比较基因组学等研究。它以快捷、简便以及不需要预知基因组序列的特点与优势，已被广泛应用于品种的分类研究、种质资源的遗传基础研究、遗传图谱的构建等方面。随着EST数量的迅猛增长，EST逐渐发展成为寻找SSR等多态性分子标记的主要数据来源。与基因组SSR相比，EST-SSR来源于基因转录的编码区域，可直接反映相关基因的多样性，并易于标记功能基因，可更好地服务于果树标记辅助育种、分子系统发育和品种鉴定等研究。现有EST-SSR在果树作物的种质鉴定中，多采用计算机软件绘制数字化指纹图谱，并结合统计学软件进行聚类分析，但聚类分析的结果往往无法用于品种鉴别。且该类研究常采用0-1指纹技术并构建出聚类树。在品质鉴定时操作量非常大，不具备时效性，通过聚类树不好判断区分品种的引物，而且不够直观。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于EST-SSR标记鉴定枇杷品种的方法，用于快速区分、鉴定枇杷品种。

为实现上述目的，本发明技术方案如下：

一种基于EST-SSR标记鉴定枇杷品种的方法，其所用来鉴定枇杷品种的引物是通过针对枇杷EST序列设计的SSR引物经3次筛选出条带清晰、多态性好的引物，具体包括：

本发明主要是针对本课题组所搜集的18个重要枇杷品种进行区分，这18个枇杷品种包括：1.‘大五星’、2.‘大房’、3.‘宁海白’、4.‘溪上白沙’、5.‘洛阳青’、6.‘荸荠种’7.‘冠玉’、8.‘鸡蛋白’、9.‘青种’、10.‘白玉’、11.‘甜种’、12.‘迟红’、13.‘六分种’、14.‘白毛五儿’、15.‘大玫瑰红袍’、16.‘大叶杨墩’、17.‘尖头大红袍’、18.‘宝珠’。

对于上述品种，利用上述引物快速鉴定区分枇杷品种的方法，具体包括如下步骤：

(1)提取需要进行鉴定、区分的枇杷DNA，稀释备用；