[发明专利]对铜绿假单胞菌具有抗菌性能的Magainin肽修饰物及其制备方法

权利要求书

1.对铜绿假单胞菌具有抗菌性能的Magainin肽修饰物,所述Magainin肽为天然肽Magainin I，其氨基酸序列为SKMIEGVFAKGFKGASHLFKGIG，或天然肽Magainin II，其氨基酸序列为SNMIEGVFAKGFKKASHLFKGIG，其特征在于：按C端到N端的顺序Magainin肽的23位甘氨酸与序列K(nph)KK₂(β-Ala-NH₂)₄中的6-（4-吗啉-1，8-萘酰亚胺）-赖氨酸连接，即：

M-MGN-I:HO-SKMIEGVFAKGFKGASHLFKGIGK(nph)KK₂(β-Ala-NH₂)₄，

M-MGN-II:HO-SNMIEGVFAKGFKKASHLFKGIGK(nph)KK₂(β-Ala-NH₂)₄。

2.根据权利要求1所述的Magainin肽修饰物，其特征在于，所述序列K(nph)KK₂(β-Ala-NH₂)₄的结构为：

3.权利要求1所述Magainin肽修饰物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）采用固相Fmoc技术，将反应瓶中的羧基树脂和侧链带有保护基的Fmoc丝氨酸溶于DMF溶液，在有机碱和偶合剂存在下反应后，得到与侧链带有保护基的丝氨酸偶联的树脂；

（2）将步骤（1）得到的侧链带有保护基的丝氨酸偶联的树脂放入微波多肽合成仪中，加入体积比1/4的六氢哌啶/DMF混合液，在微波作用下脱除Fmoc保护基团，然后加入有机碱、偶合剂和侧链带有保护基的Fmoc赖氨酸或者侧链带有保护基的Fmoc天冬酰胺，微波反应后，得到进一步与侧链带有保护基的Fmoc赖氨酸或者侧链带有保护基的天冬酰胺偶联的树脂；

（3）依次重复步骤（2），其中原料氨基酸依次替换为Fmoc甲硫氨酸、Fmoc异亮氨酸、侧链带有保护基的Fmoc谷氨酸、Fmoc甘氨酸、Fmoc缬氨酸、Fmoc苯丙氨酸、Fmoc丙氨酸、侧链带有保护基的Fmoc赖氨酸、Fmoc甘氨酸、Fmoc苯丙氨酸、侧链带有保护基的Fmoc赖氨酸、Fmoc甘氨酸或者侧链带有保护基的Fmoc赖氨酸、Fmoc丙氨酸、侧链带有保护基的Fmoc丝氨酸、侧链带有保护基的Fmoc组氨酸、Fmoc亮氨酸、Fmoc苯丙氨酸、侧链带有保护基的Fmoc赖氨酸、Fmoc甘氨酸、Fmoc异亮氨酸，Fmoc甘氨酸，Fmoc6-（4-吗啉-1，8-萘酰亚胺）-赖氨酸、双Fmoc赖氨酸、双Fmoc赖氨酸、Fmoc-β-丙氨酸，脱除Fmoc保护基团，最终得到与上述氨基酸依次偶联的树脂；

（4）切割步骤（3）所得与上述氨基酸依次偶联的树脂，得到化合物

M-MGN-I:HO-SKMIEGVFAKGFKGASHLFKGIGK(nph)KK₂(β-Ala-NH₂)₄，或者M-MGN-II:HO-SNMIEGVFAKGFKKASHLFKGIGK(nph)KK₂(β-Ala-NH₂)₄。

4.根据权利要求3所述Magainin肽修饰物的制备方法，其特征在于：所述侧链带有保护基的Fmoc丝氨酸、侧链带有保护基的Fmoc赖氨酸、侧链带有保护基的Fmoc天冬酰胺、侧链带有保护基的Fmoc谷氨酸、侧链带有保护基的Fmoc组氨酸依次为叔丁基保护的Fmoc丝氨酸、叔丁氧羰基保护的Fmoc赖氨酸、（三苯甲基保护的）Fmoc天冬酰胺、三苯甲基保护的Fmoc谷氨酸、叔丁氧羰基保护的Fmoc组氨酸。

5.根据权利要求3所述Magainin肽修饰物的制备方法，其特征在于：所述羧基树脂为2-氯三苯甲基氯树脂；所述有机碱为二异丙基乙基氨；所述偶合剂为苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐。

6.根据权利要求3所述Magainin肽修饰物的制备方法，其特征在于：所述各种氨基酸与羧基树脂的摩尔比均为2～8/1。

7.根据权利要求3所述Magainin肽修饰物的制备方法，其特征在于：所述偶合剂与羧基树脂摩尔比2～8/1。