[发明专利]对铜绿假单胞菌具有抗菌性能的Magainin肽修饰物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物化学领域，具体涉及的是对铜绿假单胞菌有优异抗菌性能的Magainin肽修饰物及其制备方法。

背景技术

抗菌肽（Antimicrobial Peptides）是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽，分子量为2000～7000左右，由20～60个氨基酸残基组成。这类活性多肽多数具有强碱性、热稳定性以及广谱抗菌等特点。抗菌肽通过破坏膜的完整性，使细胞内外屏障丧失，从而杀死细菌。抗菌肽因为抗菌活性高，抗菌谱广，种类多，可供选择的范围广，靶菌株不易产生抗性突变等原因，而被认为将会在医药工业上有着广阔的应用前景。

Magainin肽是1987年Zasloff等人从非洲爪蟾皮肤中提取的一类天然肽，主要包含Magainin I和Magainin II两种结构十分类似的肽。天然肽Magainin I氨基酸序列为：SKMIEGVFAKGFKGASHLFKGIG；天然肽Magainin II其氨基酸序列为：SNMIEGVFAKGFKKASHLFKGIG，Magainin肽具有广谱的抗微生物活性，对许多细菌、真菌、原虫具有杀灭效果，且具有一定的抗肿瘤效果。

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）广泛存在于自然界中，是一种可引起人类各种感染性疾病的条件致病菌。在一些慢性疾病和免疫功能低下以及侵入性治疗或严重创伤的患者中极易罹患该菌感染，是医院内感染的主要致病菌之一。从连续7年的NPRS(中国国家重症监护病房细菌耐药监测)研究统计的数字来看，从中国ICU(重症加强护理病房)分离出的致病菌中，铜绿假单胞的数量占第一位。铜绿假单胞菌作为条件致病菌之一可引起呼吸道感染、泌尿系统感染、伤口感染、菌血症等。

近年来由于抗生素的广泛使用，铜绿假单胞菌对NCCLS(美国临床实验室标准化委员会)推荐的一线用药，如庆大霉素、头孢噻甲羧肟、哌拉西林等亦早己产生不同程度的耐药性，这就使得该菌的抗感染治疗越来越困难，克服铜绿假单胞菌耐药性问题是当务之急。专利公开号：1049166，由理查德·A·霍顿等人发明的一系列magainin肽取代类似物，虽然具有较好的抗菌活性但并不具有靶向清除细胞内细菌的能力。中国专利申请号：200810157206.X，200110085397.4公开的运用基因工程方法合成的蜂毒素-马盖宁肽杂合物也不具有靶向清除细胞内细菌的能力。因此，研制出新型的对铜绿假单胞菌等多耐药菌具有良好抗菌效果抗菌肽，具有十分重要的现实意义。

发明内容

为了克服上述缺点，本发明的目的在于提供对铜绿假单胞菌具有抗菌性能的Magainin肽修饰物及其制备方法，所述两种新型的Magainin肽修饰物M-MGN-I和M-MGN-II能够具有优良的广谱抗菌效果，尤其对对感染细胞或或活体内的铜绿假单胞菌有良好的抗菌效果，且能够特异性的清除A549和HBE细胞中的铜绿假单胞菌。

本发明的目的是通过如下技术方案实现：

本发明提供对铜绿假单胞菌具有抗菌性能的Magainin肽修饰物,所述Magainin肽为天然肽Magainin I其氨基酸序列为SKMIEGVFAKGFKGASHLFKGIG，或天然肽Magainin II其氨基酸序列为SNMIEGVFAKGFKKASHLFKGIG，其特征在于：按C端到N端的顺序Magainin肽的23位甘氨酸与序列K(nph)KK₂(β-Ala-NH₂)₄中的6-（4-吗啉-1，8-萘酰亚胺）-赖氨酸连接，即：

M-MGN-I:HO-SKMIEGVFAKGFKGASHLFKGIGK(nph)KK₂(β-Ala-NH₂)₄，

M-MGN-II:HO-SNMIEGVFAKGFKKASHLFKGIGK(nph)KK₂(β-Ala-NH₂)₄。

所述M-MGN-I和M-MGN-II N端增加了四个带正电的β-丙氨酸，使得N端的正电性增强，增强了“头基”效应，从而增强了抗菌性能。

根据本发明所述的Magainin肽修饰物，所述序列K(nph)KK₂(β-Ala-NH₂)₄的结构为：