[发明专利]一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法

权利要求书

1.一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法，其特征在于采用以下步骤：

1）将鱼肌肉加入10mMTris-Hcl溶液中,组织捣碎后，4℃离心取上清液；

2）将所得的上清液于沸水浴中加热15min，4℃离心后取上清液；

3）往步骤2）所得的上清液中加入10mM Cacl₂及100mM PMSF，4℃离心两次，取上清液；

4）往步骤3）制得的上清液中缓慢加入TCA溶液，得TCA混合溶液；

5）将步骤4）制得的TCA混合溶液在4℃缓慢搅拌，边搅拌边加入NaOH溶液调节PH=5.2；

6）将步骤5）制得的溶液在4℃缓慢搅拌，得到的上清液于4℃离心，弃去上清液，得小清蛋白沉淀物；

7）将小清蛋白沉淀物加少量蒸馏水完全溶解后，往蒸馏水溶液中缓慢添加TCA溶液混匀得TCA混合溶液，然后在4℃缓慢搅拌10min，边搅拌边加入NaOH溶液调节PH=5.2，得混合溶液，在温度不变的条件下搅拌混合溶液1h后离心，在转速为8000r/min离心20min，弃去上清液，将得到的沉淀经真空干燥机干燥后于-80℃冷冻，得到纯化的小清蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法，其特征在于步骤1）中所述鱼肉和Tris-HCL溶液质量体积比为1：5。

3.根据权利要求1所述的一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法，其特征在于步骤1）离心转速为8000r/min，时间为15min。

4.根据权利要求1所述的一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法，其特征在于步骤1）所述Tris-HCL溶液的PH为7.5。

5.根据权利要求1所述的一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法，其特征在于步骤2）中离心的转速为12000r/min，时间为20min。

6.根据权利要求1所述的一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法，其特征在于步骤3）离心转速为10000r/min，时间为20min。

7.根据权利要求1所述的一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法，其特征在于步骤4）和步骤7）所述TCA溶液浓度为100%，TCA混合溶液中TCA浓度为3%。

8.根据权利要求1所述的一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法，其特征在于步骤5）和步骤7）中搅拌时间为10min，NaOH的浓度为6mol/L。

9.根据权利要求1所述的一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法，其特征在于步骤6）中搅拌时间为1h，离心转速为8000r/min，时间为20min。