[发明专利]一种杂交鹅掌楸人工种子的制作方法

权利要求书

1.一种杂交鹅掌楸人工种子的制作方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤一，培养杂交鹅掌楸子叶胚

待杂交鹅掌楸体细胞胚长至子叶胚时，从培养基中取出子叶胚，无菌接种在子叶胚生长培养基上培养；所述子叶胚生长培养基的pH 为5.8，成分为MS +IAA 0.5mg/L+ ZT 2mg/L+谷氨酸400 mg/L +3.0%蔗糖+0.7%琼脂；培养条件为以LED红光为光源，在光强35μmol·m^-2·s^-1条件下光照14小时；

步骤二，制作杂交鹅掌楸子叶胚胶囊

配制杂交鹅掌楸人工胚乳，并进行灭菌处理；将无菌的人工胚乳和CaCl₂溶液分别置于不同烧杯中；在无菌环境下，将在所述子叶胚生长培养基生长7天后的子叶胚放入所述人工胚乳中，每毫升人工胚乳中含有1个子叶胚；然后用内径4mm的吸管将一个子叶胚连同人工胚乳一起吸入，滴至CaCl₂溶液中，每滴体积0.8ml，固化10 min后，形成杂交鹅掌楸子叶胚胶囊；

所述的人工胚乳为海藻酸钠水溶胶，成分为4.0%海藻酸钠+MS+NAA0.4mg/L+2,4-D 0.2 mg/L +3.0%蔗糖；

步骤三，制备杂交鹅掌楸人工种皮

将海藻酸钠与明胶依质量比为4:1进行混合配成质量浓度为5%的海藻酸钠/明胶人工种皮包埋液，并经过灭菌处理；将无菌的人工种皮包埋液和2.0%CaCl₂溶液分别置于不同烧杯中；取出所述杂交鹅掌楸子叶胚胶囊，用无菌水清洗干净，放入所述人工种皮包埋液，一分钟后取出，再放到2.0% CaCl₂溶液中，络合凝固10 分钟，形成人工种子胶囊，即为杂交鹅掌楸人工种子，取出所述杂交鹅掌楸人工种子，用滤纸吸干其上液体，储藏待萌发。

2.根据权利要求1所述的一种杂交鹅掌楸人工种子的制作方法，其特征在于：所述的MS为Murashige和Skooge培养基，IAA为吲哚乙酸，ZT为玉米素；NAA为α-萘乙酸；2,4-D为2,4-二氯苯氧乙酸。

3.根据权利要求1所述的一种杂交鹅掌楸人工种子的制作方法，其特征在于所述MS的成分为：

大量元素，KNO₃ 1900mg/L，NH₄NO₃ 1650mg/L，MgSO₄·7H₂O 370mg/L,，KH₂PO₄ 170mg/L，CaCl₂·2H₂O 440mg/L；

微量元素，MnSO₄·4H₂O  22.3mg/L，ZnSO₄·7H₂O  8.6mg/L，H₃BO_3，6.2mg/L，KI 0.83mg/L，NaMoO₄·4H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L；  

铁盐溶液，FeSO₄·4H₂O  27.8mg/L，Na₂-EDTA 37.3mg/L；

有机成分， 甘氨酸 2.0mg/L，盐酸硫胺素 0.1mg/L，盐酸吡哆醇，0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，肌醇 100mg/L。