[发明专利]链球菌AUH-JLD109及其在柚皮素生物合成中的应用

权利要求书

1.一种链球菌（Streptococcus sp.）AUH-JLD109，保藏号为CGMCC No.8033。

2.如权利要求1所述的链球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的应用。

3.根据权利要求2所述的链球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的应用，其特征在于包括如下步骤：

（1）混菌种子液的培养

将链球菌（Streptococcus sp.）AUH-JLD109的种子液与大肠埃希氏菌(Escherichia coli) AUH-D2-1的种子液接种于LB液体培养基或混菌发酵培养基中培养，得到混菌种子液；所述大肠埃希氏菌(Escherichia coli) AUH-D2-1，保藏号为CGMCC No.8031；

（2）底物柚皮苷与混菌种子液共培养

将步骤（1）得到的混菌种子液转接到LB培养基或混菌发酵培养基中，加入柚皮苷粗品母液进行共培养；

（3）代谢产物的分离纯化；

所述混菌发酵培养基的重量组成为：1.0-1.5%可溶性淀粉，1.0-2.0%蛋白胨，磷酸盐0.3-0.7%和0.002%-0.008%的硫酸铁，余量为水；磷酸盐为磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的混合物，磷酸氢二钾与磷酸二氢钾的质量比为2:1。

4.根据权利要求3所述的链球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的应用，其特征在于所述步骤（1）中链球菌AUH-JLD109的种子液通过下述方法培养：将低温冷冻保存的链球菌AUH-JLD109融化并按15-20%接种量接种到盛有新鲜BHI液体培养基的试管中，37℃恒温培养箱内培养24小时；再以10%接种量将试管中的菌株AUH-JLD109重新转接到新鲜BHI液体培养基中，继续培养18-24小时作为种子液。

5.根据权利要求3所述的链球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的应用，其特征在于所述步骤（1）中大肠埃希氏菌AUH-D2-1的种子液通过下述方法培养：将低温冷冻保存的大肠埃希氏菌AUH-D2-1融化并按10-15%接种量接种到盛有新鲜LB液体培养基的试管中， 37℃恒温培养箱内培养下培养24小时，再以10%接种量将试管中菌株AUH-D2-1重新转接到新鲜LB液体培养基中，继续18-24小时作为种子液。

6.根据权利要求3所述的链球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的应用，其特征在于所述步骤（1）中将链球菌（Streptococcus sp.）AUH-JLD109的种子液与大肠埃希氏菌(Escherichia coli) AUH-D2-1的种子液各以10%的接种量接种于LB液体培养基中，培养18-24小时。

7.根据权利要求3所述的链球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的应用，其特征在于所述步骤（2）混菌种子液按10-15%接种，加入柚皮苷粗品母液使柚皮苷的终浓度为5.5-6.5毫摩尔/升，37℃恒温培养箱内培养2-3天。

8.根据权利要求3所述的链球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的应用，其特征在于所述步骤（2）中柚皮苷粗品母液中底物柚皮苷浓度为110-160毫摩尔/升。

9.根据权利要求3所述的链球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的应用，其特征在于所述步骤（2）中采用混菌发酵培养基进行共培养。

10.根据权利要求3所述的链球菌AUH-JLD109在柚皮素生物合成中的应用，其特征在于所述步骤（3）中分离纯化为：等体积的乙酸乙酯将培养物萃取2次，萃取液过滤后蒸干，加入100%甲醇溶液，用制备柱在HPLC上进行分离，得到代谢产物柚皮素。