[发明专利]一种微藻藻株人工选育方法

权利要求书

1.一种微藻藻株人工选育方法，，其特征在于：包括微藻藻株常压室温等离子体诱变和基于吸光度与特异性荧光染料荧光强度变化的藻株筛选流程，具体操作包括：

(1)利用常压室温等离子体对天然藻株进行诱变：使用室温常压等离子体仪对微藻培养液进行诱变；

(2)将诱变处理后的微藻涂布于固体培养基上，在选择性压力条件下或正常培养条件下进行培养，同时以未诱变处理的藻液作为对照，对于正常培养条件下，至藻落生长出后，分别对诱变和对照组进行藻落计数，以致死率=（1-诱变藻落数/对照藻落数）×100%大于或等于90%为成功诱变的指标，对生长出诱变藻落进行96孔板培养筛选；对于选择压力下，生长出的藻落即用于96孔板培养筛选；

(3)利用酶标仪或者分光光度计对孔板培养的微藻OD值进行测定，获得藻细胞生长情况；

(4)利用染料对孔板中液体培养的微藻细胞进行染色，测定细胞内代谢物的积累情况；

(5)以生长速度变化或代谢物含量变化情况为指标，最终确定目标藻株。

2.按照权利要求1中所述微藻藻株人工选育方法，其特征在于：天然藻株包括绿藻、金藻、硅藻单细胞藻类或者螺旋藻。

3.按照权利要求1所述微藻藻株人工选育方法，其特征在于：待诱变微藻细胞浓度在100-1000万细胞/毫升，诱变微藻藻液在10～200μL，电源输出功率为50～200W，工作气流量为1～20SLM，等离子体发射源与样品之间距离为1～10mm，放电时间5秒～2分钟。

4.按照权利要求1所述微藻藻株人工选育方法，其特征在于：正常培养条件为目标微藻常规培养条件；选择压力性条件为根据期望诱变藻株所具有的特点，在正常培养条件下，升高或降低温度，增强或减弱光照，使用营养缺陷型培养基或含有重金属离子、含卤素有机化合物、烃类化合物或抗生素的培养基。

5.按照权利要求1所述微藻藻株人工选育方法，其特征在于：根据期望得到的诱变藻株性状，以生长速度提高或降低、在选择性压力条件下能够存活以及细胞内目标代谢物的含量高低为指标，确定最终的目标藻株。