[发明专利]一种野牛草愈伤组织的诱导方法

权利要求书

1.一种野牛草愈伤组织的诱导方法，其特征在于，其以野牛草种子为外植体，消毒后进行萌发，挑选已萌发长出胚根的种子，转入愈伤组织诱导培养基，在25±1℃条件下黑暗培养20-25天；所述的愈伤组织诱导培养基为MS培养基+2，4-D3.0-3.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH值5.8-6.0的固体培养基。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）种子的预处理：将种子从颖苞中取出；

2）外植体的消毒：将步骤1）中得到的种子用自来水洗净后，置于无菌操作台中用70%的酒精和有效氯浓度为7%-10%的次氯酸钠溶液进行消毒，再用无菌水清洗4-5遍；

3）种子的萌发：将步骤2）消毒过的种子置于铺有湿润无菌滤纸的培养皿中，置于25℃的光照培养箱中，暗培养1～2天，期间要保证无菌培养皿中有足够的无菌水以便种子萌发；

4）成熟胚愈伤组织的诱导：从培养皿中挑选已萌发长出胚根的种子，转入愈伤组织诱导培养基中进行愈伤诱导，所述愈伤组织诱导培养基为MS培养基+2，4-D3.0-3.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH值5.8-6.0，培养条件为25±1℃条件下黑暗培养，按照常规方法进行高压灭菌。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤2）外植体的消毒过程包括：先将洗净的种子放入无菌容器中，在无菌工作台中先用70%的酒精消毒60s，接着用有效氯浓度为7%-10%的的次氯酸钠溶液消毒30min，后再用无菌水清洗4-5遍。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤3）种子的萌发过程包括：先在培养皿中铺上双层滤纸，高压灭菌20min后置于无菌操作台中，用无菌水润湿，将经过步骤2）消毒过的种子置于无菌滤纸上，并向培养皿中加入无菌水，之后将培养皿封口后置于光照培养箱中黑暗培养。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤4）中愈伤组织诱导培养基为MS培养基+2，4-D3.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH值5.8-6.0。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，诱导出愈伤组织后进行继代培养，继代培养基为：MS培养基+10mg/L脯氨酸+1g/L水解络蛋白+2，4-D3mg/L+NAA1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L；培养条件为25±1℃条件下黑暗培养。