[发明专利]对氧磷酶1基因的表达纯化方法在审
| 申请号： | 201310701927.3 | 申请日： | 2013-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN104726497A | 公开（公告）日： | 2015-06-24 |
| 发明（设计）人： | 张耀洲;谭淑敏;李杰;王小飞;盖其静 | 申请（专利权）人： | 天津耀宇生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N15/55;C12N9/16 |
| 代理公司： | 北京汇泽知识产权代理有限公司 11228 | 代理人： | 孙艳敏 |
| 地址： | 300457 天津市滨海新区经济技术开发区*** | 国省代码： | 天津;12 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 氧磷酶 基因 表达 纯化 方法 | ||
1.一种对氧磷酶1基因的表达纯化方法，其特征在于，步骤如下：
（1）扩增对氧磷酶1基因，连接到转移载体pFastBacTM1上构建重组转移载体，重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，获得含有对氧磷酶1基因的重组杆状病毒DNA，将重组杆状病毒DNA转染家蚕BmN细胞使其在细胞内复制装配成含对氧磷酶1基因的重组病毒；
（2）步骤（1）的重组病毒接种家蚕五龄幼虫，发病后取蚕血，经离心过滤除杂并经浓缩后用汽巴蓝亲和层析以及抗体亲和层析纯化蚕血，获得对氧磷酶1蛋白。
2.根据权利要求1所述的对氧磷酶1基因的表达纯化方法，其特征在于，步骤（1）所述扩增使用的引物核苷酸序列如SEQ ID NO: 1~2所示。
3.根据权利要求1所述的对氧磷酶1基因的表达纯化方法，其特征在于，步骤（2）所述离心为4℃条件下以10000 rpm的转速离心30 min；所述过滤除杂是采用9层医用纱布过滤后再经过0.45μm滤膜；所述浓缩是用10 kD超滤管进行。
4.根据权利要求1所述的对氧磷酶1基因的表达纯化方法，其特征在于，步骤（2）所述汽巴蓝亲和层析使用的固定相为汽巴蓝琼脂糖-3GA3000-CL。
5.根据权利要求1所述的对氧磷酶1基因的表达纯化方法，其特征在于，步骤（2）所述抗体亲和层析所用抗体是通过原核表达的对氧磷酶1基因四次免疫新西兰雄兔后取血然后通过ProteinA纯化制得。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于天津耀宇生物技术有限公司;，未经天津耀宇生物技术有限公司;许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201310701927.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
