[发明专利]一种基于微流控芯片和核酸适配体识别技术的腺苷检测方法

权利要求书

1.一种基于微流控芯片和核酸适配体识别技术的腺苷检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)生物素修饰的腺苷核酸适配体和生物素修饰的酪蛋白通过生物素-亲合素结合方法固定于亲合素修饰微球的表面形成功能化微球，所述微球固定在微流控芯片检测区的相应微型小室中，形成微流控微珠阵列检测芯片；

(2)将辣根过氧化物酶和巯基修饰的捕获探针修饰到纳米颗粒上作为信号标记；

(3)将步骤(2)形成的功能化纳米颗粒流入微流控微珠阵列检测芯片的检测区与微珠阵列杂交，洗脱后流入腺苷溶液与杂交微球孵育；

(4)流入过氧化物酶底物溶液，通过多酶纳米信号放大技术将生物素化的酪胺结合到微球表面的酪蛋白上，洗脱后流入亲合素标记的量子点，所述量子点能与微球表面酪蛋白上结合的生物素识别并固定；

(5)通过计算流入腺苷后微球表面荧光与未流入腺苷微球表面荧光的比值对腺苷进行定性和定量。

2.根据权利要求1所述的基于微流控芯片和核酸适配体识别技术的腺苷检测方法，其特征在于：步骤(1)中所述的功能化微球表面修饰的生物素修饰的腺苷核酸适配体和生物素修饰的酪蛋白，其摩尔浓度比值为1∶100～1∶120。

3.根据权利要求1所述的基于微流控芯片和核酸适配体识别技术的腺苷检测方法，其特征在于：步骤(1)中所述的微球是二氧化硅微球、聚苯乙烯类有机聚合物微球、磁性微球和生物大分子聚合物微球中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的基于微流控芯片和核酸适配体识别技术的腺苷检测方法，其特征在于：步骤(2)中所述的纳米颗粒为金纳米颗粒、二氧化硅纳米颗粒和聚苯乙烯纳米颗粒中的任意一种。

5.根据权利要求1所述的基于微流控芯片和核酸适配体识别技术的腺苷检测方法，其特征在于：步骤(3)中所述的腺苷溶液与杂交微球孵育，孵育时间为20～25min。

6.根据权利要求1所述的基于微流控芯片和核酸适配体识别技术的腺苷检测方法，其特征在于：步骤(4)中所述的过氧化物酶底物溶液包含0.007％～0.009％H₂O₂、250～350μM生物素化的酪胺、50～100mM的NaCl。

7.根据权利要求1所述基于微流控芯片和核酸适配体识别技术的腺苷检测方法，其特征在于：步骤(4)中所述的量子点为CdSe、CdTe、CdS和复合型量子点中的一种，其发射范围为400nm～700nm。