[发明专利]从野生龙胆草里提取龙胆苦甙的新型工艺方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生龙胆草里提取龙胆苦甙的方法，特别是涉及一种超临界CO₂流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化的新方法。

背景技术：

龙胆草为多年生草本，高1-2尺。叶对生，下部叶2-3对很小，呈现鳞片状，中部和上部叶披针形，表面暗绿色，背面淡绿色，有三条明显叶脉，无叶柄。花生于枝梢或近梢的叶腋间，开蓝色筒状钟形花。果实长椭圆形稍扁，成熟后二瓣开裂，种子多数，很小。根茎短，簇生多数细长根，淡黄棕色或淡黄色。头花龙胆本品长15-30cm。根茎较粗，微弯曲，长0.5-7cm。直径0.5-1cm，表面灰褐色，粗糙，有疣状突起的茎痕。根及根茎入药。味苦，性寒。归肝、胆经。有清热燥湿，泻肝胆实火的作用。主治高血压，头晕耳鸣，胆囊炎、急性传染性肝炎、阴部湿痒、湿热黄疸、疮疖痈肿，口苦和惊风等症，为保肝利胆之良药。

龙胆草根含裂环烯醚萜甙类苦味成分：龙胆苦甙，当药苦甙，当药龙胆草甙，苦龙胆酯甙，痕量苦当药酯甙；苦甙总含量可高达7.33％，而龙胆苦甙含量可达6.34％。生物碱包含龙胆碱即秦艽碱甲，龙胆黄碱。

国内一般用溶剂法提取苦甙，存在着操作温度高，得率偏低，耗时长等缺点，本发明的不同之处在于所用的提取分离方法主要采用超临界CO₂流体萃取法，后期采用大孔树脂纯化龙胆苦甙，产品不仅得率高，而且纯度高。

发明内容：

本发明优点：

本发明主要采用超临界CO₂流体萃取技术，用乙醇做夹带剂，萃取时间短，有效成分活性高；后期采用大孔树脂吸附，纯化效果好。本发明方法简单易操作，适合大生产。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种利用超临界CO₂流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化龙胆苦甙的新方法，其步骤如下：

(1)将龙胆草切断3～6cm，加入到CO₂超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，萃取压力为20MPa～40MPa，温度为50℃～60℃，萃取时间100min～140min，得萃取物；

(2)将经步骤(1)处理的龙胆苦甙萃取液用盐酸调其pH值为3.0～4.0，静置、抽滤、减压浓缩得龙胆苦甙粗提物；

(3)采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为0.2-0.3MPa，截留率为90-95％；

(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化龙胆草甙、树脂型号为AB-8、D4006或NKA-II中的一种，在径高比1∶6-1∶8，体积流量2-4BV／h，流速为3-5BV／h下进行吸附；

(5)用体积分数70-80％乙醇，体积流量2-3BV／h条件下进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；

(6)回收乙醇，将龙胆苦甙各阶段洗脱液浓缩，得苦甙半成品，其纯度为75％以上；

(7)粗粉溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70-90％浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；

(8)回收乙醇，收集洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到纯度为98％以上龙胆苦甙成品。

本发明应用超临界CO₂流体萃取可确保原有的色、味不因受热破坏，更能确保其中热敏性，易氧化物质不被破坏；还可在萃取的过程中同时对萃取物进行分离纯化；本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附草苁蓉甙，吸附快、解析也快，吸附容量较大。

具体实施方式：

实施案例1：一种利用超临界CO₂流体萃取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化龙胆苦甙的新方法，其步骤如下：

(1)1000g龙胆草全草切断至3cm，加入到CO₂超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1％，萃取压力为20MPa，温度为50℃，萃取时间100min，CO₂流量为1mg／g生药·min，得萃取物；

(2)将经步骤(1)处理的龙胆苦甙萃取液用盐酸调其pH值为3.0，静置、抽滤、减压浓缩得龙胆苦甙粗提物；

(3)采用超滤膜分离，膜操作压力为0.2MPa，截留分子量1000，截留率为90％；