[发明专利]纳洛酮的酶法制备及其药物组合物

权利要求书

1.酶法制备纳洛酮的方法，其包括，

（A）任选将蒂巴因氧化氢化成14-羟基-7,8-二氢可待因酮；

（B）在脱甲基酶的作用下，将14-羟基-7,8-二氢可待因酮生成14-羟基-7,8-二氢降吗啡酮纯度高并含14-羟基-7,8-二氢可待因酮的组合物，其中所述脱甲基酶的氨基酸序列：

（1）如SEQ ID No:2所示，或

（2）是对SEQ ID No:2缺失、添加和/或取代一个或几个氨基酸残基而获得的保留SEQ ID No:2活性的序列；

（C）将步骤（B）获得的组合物中的14-羟基-7,8-二氢降吗啡酮烷基化成纳洛酮，获得纳洛酮纯度高并含14-羟基-7,8-二氢可待因酮的组合物；和，

（D）任选（但并不优选）进一步纯化和/或盐酸化步骤（C）获得的组合物。

2.权利要求1所述的方法，其中，在步骤（C）获得的组合物中，纳洛酮的纯度大于95%，优选大于96%，更优选大于97%，如大于97.5%；或，在步骤（C）获得的组合物中，14-羟基-7,8-二氢可待因酮的含量小于5%，优选小于4%，更优选小于3%，如小于2.5%；或，在步骤（C）中，14-羟基-7,8-二氢降吗啡酮被溴丙烯烷基化成纳洛酮。

3.权利要求1所述的方法，其中，在步骤（A）中，蒂巴因在甲酸中被过氧化氢氧化成14-羟基可待因酮，然后14-羟基可待因酮被氢气氢化成14-羟基-7,8-二氢可待因酮。

4.权利要求1所述的方法，其中，在步骤（B）获得的组合物中，14-羟基-7,8-二氢降吗啡酮的纯度大于90%，优选大于92%，更优选大于93%，如大于93.5%；或，在步骤（B）获得的组合物中，14-羟基-7,8-二氢可待因酮的含量小于10%，优选小于8%，更优选小于7%，如小于6%；或，步骤（B）不包括对步骤（B）获得的组合物进一步提纯的步骤。

5.含纳洛酮的组合物，其包含纳洛酮并含14-羟基-7,8-二氢可待因酮，其中纳洛酮的纯度大于95%，优选大于96%，更优选大于97%，如大于97.5%；或，其中14-羟基-7,8-二氢可待因酮的含量小于5%，优选小于4%，更优选小于3%，如小于2.5%。

6.权利要求5所述的组合物，优选其是由权利要求1～4之任一所述的方法制备的。

7.权利要求5或6所述的组合物，其成药效果与纳洛酮无显著区别。

8.权利要求5～7之任一所述的组合物在制备纳洛酮能治疗的疾病（选自：中毒性疾病，如急性海洛因中毒、急性酒精中毒、急性亚硝酸盐中毒、有机磷农药中毒和/或急性一氧化碳中毒；中枢系统疾病，如脑梗死（脑中风）、急性重症脑出血、外伤性弥漫性脑肿胀、急性重症颅脑损伤和/或眩晕；儿科疾病，如新生儿缺氧缺血性脑病、新生儿窒息、早产儿原发性呼吸暂停和/或小儿惊厥持续；以及，肝脏病变、精神分裂症和/或重度心肌缺血）的药物中的应用。

9.权利要求5～7之任一所述的组合物的鉴定方法，其包括检测纳洛酮和14-羟基-7,8-二氢可待因酮的存在性。

10.脱甲基酶、其编码基因、载体、细胞或制备方法，所述脱甲基酶的氨基酸序列：

（1）如SEQ ID No:2所示，或

（2）是对SEQ ID No:2缺失、添加和/或取代一个或几个氨基酸残基而获得的保留SEQ ID No:2活性的序列。