[发明专利]纳洛酮的酶法制备及其药物组合物

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体而言，本发明涉及酶法制备的纳洛酮组合物，尽管含有杂质，但是不影响其成药性能。

背景技术

纳洛酮，化学名称为17-烯丙基-4,5a-环氧基-3,14-二羟基吗啡喃-6-酮，通常以盐酸盐的形式成药，是阿片受体的拮抗剂，主要用于逆转由于吗啡类物质（毒品）造成的麻醉性镇痛以及呼吸抑制，并且能用于解救乙醇等物质引起的中毒等。

近年来，对纳洛酮的研究主要着眼于其药物制剂和与其它药物的联用上，如参见中国专利（申请）03807796.5、200680005969.1、200510080479.5、201180023192.2、200880006847.3等。另外，中国专利（申请）200710039118.5和201010211706.4涉及纳洛酮及其中间体的制备技术，但是仍旧采用化学合成技术，没有跳出80年代以来利用氢溴酸或者氯甲酸等来合成的框架，即，以蒂巴因为原料，氧化氢化产生14-羟基-7,8-二氢可待因酮，然后经过复杂的过程，在添加保护基的条件下，利用氢溴酸或者氯甲酸等试剂来脱甲基，然后脱除保护基，最后经烷基化来生成纳洛酮，其中反应（尤其是脱甲基过程）条件剧烈，试剂及其残留对人体危害大。

本发明人最终获得了一种能够识别立体稠环系的脱甲基酶，能够在温和条件下将14-羟基-7,8-二氢可待因酮转化成14-羟基-7,8-二氢降吗啡酮，从而可以直接经烷基化来生成纳洛酮。另外，清除共沉淀/结晶的14-羟基-7,8-二氢可待因酮杂质会带来较大损失，而本发明人研究发现，如果不清除杂质而直接烷基化生成纳洛酮，得到的纳洛酮纯度仍旧大于97%，符合药用要求，而其中14-羟基-7,8-二氢可待因酮杂质并不对其直接成药构成影响，因而作为药物可以进一步降低原料药成本。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供新的制备纳洛酮的方法，其中使用了现有技术所没有提示的酶，使得酶反应条件温和，对人体基本无害。另外，本发明还提供了由该方法制备获得的纳洛酮组合物及其应用，尽管该组合物中含有杂质，但是不影响其成药性能。还有，本发明还提供了纳洛酮组合物的鉴定方法以及制备中所用的酶等。

具体而言，在第一方面，本发明提供了酶法制备纳洛酮的方法，其包括，

（A）任选将蒂巴因氧化氢化成14-羟基-7,8-二氢可待因酮；

（B）在脱甲基酶的作用下，将14-羟基-7,8-二氢可待因酮生成14-羟基-7,8-二氢降吗啡酮纯度高并含14-羟基-7,8-二氢可待因酮的组合物，其中所述脱甲基酶的氨基酸序列：

（1）如SEQ ID No:2所示，或

（2）是对SEQ ID No:2缺失、添加和/或取代一个或几个氨基酸残基而获得的保留SEQ ID No:2活性的序列；

（C）将步骤（B）获得的组合物中的14-羟基-7,8-二氢降吗啡酮烷基化成纳洛酮，获得纳洛酮纯度高并含14-羟基-7,8-二氢可待因酮的组合物；和，

（D）任选进一步纯化和/或盐酸化步骤（C）获得的组合物。

这是首次报道的酶法参与制备纳洛酮的方法，其中使用了脱甲基酶，其氨基酸序列：（1）如SEQ ID No:2所示，或（2）是对SEQ ID No:2缺失、添加和/或取代一个或几个氨基酸残基而获得的保留SEQ ID No:2活性的序列。

在本文中，“任选”具有其词典意义，即选择或者不选择。例如，本发明第一方面的方法可以选择包括步骤（A），以蒂巴因（Thebaine）为原料来制备纳洛酮；也可以选择不包括步骤（A），以14-羟基-7,8-二氢可待因酮为原料来制备纳洛酮。通常优选前者。

又如，本发明第一方面的方法可以选择包括步骤（D）；也可以选择不包括步骤（D），即产生纳洛酮纯度高并含14-羟基-7,8-二氢可待因酮的组合物即可。本发明优选后者，不优选前者，因为本发明人发现，纳洛酮纯度高并含14-羟基-7,8-二氢可待因酮的组合物已经可以直接作为药物原料而成药，甚至可能对成药性质有益，无需昂贵的后期纯化过程（从纳洛酮中去除少量14-羟基-7,8-二氢可待因酮需要昂贵的层析分离过程）。所以，本发明第一方面的方法可以是酶法制备纳洛酮纯度高并含14-羟基-7,8-二氢可待因酮的组合物的方法。