[发明专利]一种从金银花中分离纯化绿原酸及3，5-二咖啡酰奎尼酸的方法

权利要求书

1.从金银花中分离纯化绿原酸及3，5-二咖啡酰奎尼酸的方法，其特征是，步骤为：

（1）金银花粗提物的制备：取粉碎好的金银花，用70%乙醇（盐酸调pH至4左右）加热回流提取，过滤，乙醇提取液经减压浓缩得粗提物浸膏；

（2）萃取：将上述粗提物浸膏溶于70℃左右的热水中，加盐酸调pH至2左右，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液经减压浓缩得金银花总酚酸提取物；

（3）大孔吸附树脂分离纯化：将金银花总酚酸提取物上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再依次用20%、40%、60%、80%、95%乙醇-水溶液为流动相梯度洗脱，收集40%乙醇洗脱部分，浓缩得样品1，收集80%乙醇洗脱部分，浓缩得样品2；

（4）半制备型高效液相色谱分离纯化：将样品1和样品2分别用半制备型高效液相色谱进行分离纯化，色谱柱为C₁₈ SMB 100柱，流动相为甲醇-水，检测波长为325 nm，收集目标组分馏分，将得到的馏分减压浓缩，即得到所要分离的单体化合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（1）加热回流提取时间为1-3小时。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（1）加热回流提取时提取时间为2小时。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（1）提取次数为2-6次。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（1）提取次数为3-5次（优选4次）。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（1）加热回流提取时所用乙醇的浓度为50%-95%（优选70%）。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（3）对金银花总酚酸粗提物的粗分离所用的HPD系列的大孔吸附树脂的型号有100/400/500/600/722/826（优选400）。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（4）对样品1分离纯化用甲醇-水洗脱液进行洗脱，洗脱方式有甲醇-水梯度洗脱/15%甲醇-水等度洗脱/20%甲醇-水等度洗脱/25%甲醇-水等度洗脱。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（4）对样品2分离纯化用甲醇-水洗脱液进行洗脱，洗脱方式有甲醇-水梯度洗脱/30%甲醇-水洗脱/35%甲醇-水等度洗脱/40%甲醇-水等度洗脱。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征是，控制甲醇-水洗脱液流速为20-30 mL/min（优选25 mL/min）。