[发明专利]一种从金银花中分离纯化绿原酸及3，5-二咖啡酰奎尼酸的方法

说明书

技术领域

本发明属于化工领域，具体是涉及一种从金银花中分离纯化绿原酸及3，5-二咖啡酰奎尼酸的方法。

背景技术

金银花为忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thumb.）的干燥花蕾或带初开的花，性寒，味甘，归肺、心、胃经，具有清热解毒、凉散风热的功能，用于治疗急性扁桃体炎、咽炎、乳腺炎、痢疾、肺炎、流感、肝炎、阑尾炎等疾病。金银花含有酚酸、黄酮、皂苷、挥发油等多种成分，其中酚酸类成分（包括绿原酸、咖啡酸、异绿原酸等）为主要活性成分。异绿原酸是结构极为相近的7种异构体的混合物，其中3，5-二咖啡酰奎尼酸是其中含量最高的一种。药理实验及临床实践表明金银花中的酚酸类化合物具有显著的抗癌、抗菌、抗病毒、抗氧化、抗突变、保肝利胆、降血脂、止血、增强免疫等药理作用，此外还可以促进胃液分泌及胃肠蠕动。除了其药用价值以外，金银花在保健食品、化妆品等许多领域也具有广阔的市场前景。

有关金银花中绿原酸的提取、分离、纯化研究的报道很多，但是涉及3，5-二咖啡酰奎尼酸的研究报道非常少，为了实现对金银花的综合利用，本发明提供了一种简单快速的从金银花中分离纯化绿原酸及3，5-二咖啡酰奎尼酸的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单快速的从金银花中分离纯化绿原酸及3，5-二咖啡酰奎尼酸的方法。

本发明的方案如下：

从金银花中分离纯化绿原酸及3，5-二咖啡酰奎尼酸的方法，其步骤为：

（1）金银花粗提物的制备：取粉碎好的金银花，用70%乙醇（盐酸调pH至4左右）加热回流提取，过滤，乙醇提取液经减压浓缩得粗提物浸膏。

（2）萃取：将上述粗提物浸膏溶于70℃左右的热水中，加盐酸调pH至2左右，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液经减压浓缩得金银花总酚酸提取物。

（3）大孔吸附树脂分离纯化：将金银花总酚酸提取物上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再依次用20%、40%、60%、80%、95%乙醇-水溶液为流动相梯度洗脱，收集40%乙醇洗脱部分，浓缩得样品1，收集80%乙醇洗脱部分，浓缩得样品2。

（4）半制备型高效液相色谱分离纯化：将样品1和样品2分别用半制备型高效液相色谱进行分离纯化，色谱柱为C₁₈ SMB 100柱，流动相为甲醇-水，检测波长为325 nm，收集目标组分馏分，将得到的馏分减压浓缩，即得到所要分离的单体化合物。 

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1）加热回流提取时提取时间为1-3小时，提取次数为2-6次。更加优选的是，提取时间为2小时，提取次数为4次。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1）加热回流提取时所用乙醇的浓度为50%-95%（优选70%）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（3）对金银花总酚酸粗提物的粗分离所用的HPD系列的大孔吸附树脂的型号有100、400、500、600、722和826（优选400）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（4）对样品1的分离纯化所用甲醇的浓度为15%-25%（优选20%），对样品2的分离纯化所用甲醇的浓度为30%-40%（优选35%）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（4）分离纯化用甲醇-水溶液进行洗脱，洗脱液的流速为20-30 mL/min（优选25 mL/min）。

本发明涉及从金银花中分离纯化绿原酸及3，5-二咖啡酰奎尼酸的方法，步骤为：（1）金银花粗提物的制备：取粉碎好的金银花，用70%乙醇（盐酸调pH至4左右）加热回流提取，过滤，乙醇提取液经减压浓缩得粗提物浸膏。（2）萃取：将上述粗提物浸膏溶于70℃左右的热水中，加盐酸调pH至2左右，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液经减压浓缩得金银花总酚酸提取物。（3）大孔吸附树脂分离纯化：将金银花总酚酸提取物上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再依次用20%、40%、60%、80%、95%乙醇-水溶液为流动相梯度洗脱，收集40%乙醇洗脱部分，浓缩得样品1，收集80%乙醇洗脱部分，浓缩得样品2。（4）半制备型高效液相色谱分离纯化：将样品1和样品2分别用半制备型高效液相色谱进行分离纯化，色谱柱为C18 SMB 100柱，流动相为甲醇-水，检测波长为325 nm，收集目标组分馏分，将得到的馏分减压浓缩，即得到所要分离的单体化合物。该工艺过程绿色环保，对环境无严重危害，综合成本低。