[发明专利]检测藕种携带莲真菌性腐败病病原菌的方法、试剂盒及引物有效

申请号：	201310715070.0	申请日：	2013-12-23
公开（公告）号：	CN103725782A	公开（公告）日：	2014-04-16
发明（设计）人：	魏林;梁志怀;张屹;成燕清;陈玉荣;吕刚;肖密	申请（专利权）人：	湖南省植物保护研究所
主分类号：	C12Q1/68	分类号：	C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/77
代理公司：	长沙市融智专利事务所 43114	代理人：	袁靖
地址：	410125 湖南***	国省代码：	湖南;43
权利要求书：	查看更多	说明书：	查看更多
摘要：
搜索关键词：	检测携带真菌腐败病原菌方法试剂盒引物
钻瓜网技术展会专利词库专利权人专利榜在售专利公布日期热门专利

【权利要求书】：

1.一种检测藕种携带莲真菌性腐败病病原菌的方法，其特征在于：

对藕种进行取样，提取样品基因组DNA作为模板，以

上游引物：5’-AGGACCCCTAAACTCTGTTTCTAT-3’；

下游引物：5’-CAGTTGCGAGGGTTTTACTACTAC-3’；

进行PCR反应，如果扩增得到337bp的条带，则待测样品中携带有莲真菌性腐败病病原菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

PCR扩增反应体系中含有：2.5μL含15mM MgCl₂的10×Trans Start Buffer；2.5μL浓度为2.5mM的dNTPs；1U Trans Start Taq DNA Polymerase；2μL浓度为10mM PCR上、下游混合引物；50ng模板DNA；ddH2O补足到25μL。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，

PCR扩增反应程序为：

阶段1：94℃预变性5min；阶段2：94℃20s，55℃20s，72℃30s，共循环34次；阶段3：72℃延伸4min；阶段4：4℃保持。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的莲真菌性腐败病病原菌为尖孢镰刀菌莲专化型。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，藕种包括藕莲或籽莲的藕种。

6.一种检测藕种携带莲真菌性腐败病病原菌的试剂盒，其特征在于：包括

上游引物：5’-AGGACCCCTAAACTCTGTTTCTAT-3’；

下游引物：5’-CAGTTGCGAGGGTTTTACTACTAC-3’；

所述的莲真菌性腐败病病原菌为尖孢镰刀菌莲专化型。

7.一种检测藕种携带莲真菌性腐败病病原菌的引物，其特征在于：

上游引物：5’-AGGACCCCTAAACTCTGTTTCTAT-3’；

下游引物：5’-CAGTTGCGAGGGTTTTACTACTAC-3’。