[发明专利]一种Thonningianin A单体的分离纯化方法

权利要求书

1.一种Thonningianin A单体的分离纯化方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：

（1）提取

将赶黄草药材切成0.5cm的小段，按照药材重量：70%乙醇溶液=1Kg：6L，加入浓度为70%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，提取液过滤，收集、合并滤液;

（2）浓缩

将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至原滤液体积的15-25%；

（3）大孔吸附树脂富集与洗脱

将步骤（2）浓缩后的滤液过大孔吸附树脂进行吸附，先用纯化水清洗树脂至无色后，再用60%-70%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇；

（4）聚酰胺树脂富集与洗脱

将步骤（3）浓缩后的洗脱液过聚酰胺树脂进行吸附，先用10%的乙醇清洗树脂至无色后，再用90%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇得解析产品浓缩液；

（5）高效制备液相色谱分离

色谱条件如下：

填料为C₁₈的色谱柱；

流动相组成为：乙腈-0.3%磷酸水溶液，二者体积比为45：55；

检测波长为254nm；

取步骤（4）浓缩液用溶剂过滤器采用0.45μm有机膜过滤，滤液进样，进行Thonningianin A单体的制备分离，紫外检测器在线监测，针对性收集Thonningianin A单体的制备馏分溶液，得Thonningianin A单体溶液；

（6）产品回收

将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的Thonningianin A单体溶液加热回收乙腈，Thonningianin A单体在水溶液中大量析出，放置室温后用漏斗过滤析出晶体，过滤固体于65℃干燥12小时，即得到Thonningianin A单体产品；

步骤（1）、（3）、（4）中所述乙醇的浓度均为体积百分比。

2.根据权利要求1所述的一种Thonningianin A单体的分离纯化方法，其特征在于：在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中Thonningianin A单体的峰形，取步骤（4）所得的浓缩液过滤然后进样，进行Thonningianin A单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定Thonningianin A单体在液相色谱中所对应的峰形，色谱条件如下：

填料为C₁₈的色谱柱；

流动相组成为：乙腈-0.3%磷酸水溶液，二者体积比为45：55；

检测波长为254nm。

3.根据权利要求1所述的一种Thonningianin A单体的分离纯化方法，其特征在于：步骤（6）所述Thonningianin A单体产品的纯度复检采用反相分析型液相色谱RP-HPLC法，色谱条件如下：

以C₁₈为填充剂；以乙腈-0.3%磷酸水溶液V/V=45：55为流动相；流速1.0mL/min；检测波长为254nm。