[发明专利]一种Thonningianin A单体的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及药用植物化合物单体的分离提纯方法，具体来说，涉及一种从赶黄草中分离纯化Thonningianin A单体的方法，属于中药分离纯化技术领域。

背景技术

赶黄草（Penthorum chinense Pursh）为虎耳草科 (Saxifragaceae)扯根菜属 (Penthorum)植物扯根菜（Penthorum chinense Pursh）的干燥地上部分。夏、秋季节采集，除去杂质、干燥或鲜用。赶黄草为苗族传统药物，民间以其全草入药。全草性温、味甘、无毒，具清热、利尿消尿、解毒、活血、平肝、健脾、祛黄疸等功效。主治黄疸、水肿、经闭、血崩、带下、跌打损伤，以及各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等。

Thonningianin A 是赶黄草的特征性化学成分，也是该植物中活性最高的黄酮苷类成分；Thonningianin A分子式为C₄₂H₃₄O₂₁，分子量是874.16，其结构式如下:

由于Thonningianin A是赶黄草的特征性化学成分，因此如果能以Thonningianin A作为该药材及其相关制剂的质量评价指标，将既能较真实地反映其质量又具有专属性，同时还可对赶黄草药材及其制剂的质量控制起到重要作用。

通过大量文献检索发现，目前仅有关于赶黄草中总黄酮提取工艺的报道，如“《华南理工大学》2012，赶黄草有效成分的分离鉴定及其活性与提取工艺研究”。而对于从赶黄草中分离出高纯度Thonningianin A单体产品却未见相关报道。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种Thonningianin A单体的分离纯化方法。该方法操作简便，生产周期短，分离效率高，工艺稳定，成本易控制，可实现大量Thonningianin A单体的高纯度分离制备，得到的Thonningianin A单体纯度高，可作为含量测定标准物质，并对赶黄草药材及其制剂的质量进行有效控制。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种Thonningianin A单体的分离纯化方法，包括以下工艺步骤：

（1）提取

将赶黄草药材切成0.5cm的小段，按照药材重量：乙醇溶液=1Kg：6L，加入70%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，提取液过滤，收集、合并滤液；

按照1：6的比例，既可以有效浸泡药材，又能较少的使用乙醇用量，从而降低溶剂的使用成本；而采用70%乙醇回流提取，既可将Thonningianin A这种黄酮类成分有效的提取出来，又使其他杂质成分溶出率较低，确保制备时杂质干扰少。

（2）浓缩

将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至原滤液体积的15-25%，减少浓缩液中的乙醇含量；

通过浓缩，既可回收乙醇又减少了后续步骤中富集液的体积。

（3）大孔吸附树脂富集与洗脱

将步骤（2）浓缩后的滤液过大孔吸附树脂进行吸附，用纯化水清洗树脂至无色后，再用60%-70%的乙醇洗脱产品段，至流出液无色，收集合并洗脱液，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇；

通过纯化水确保除去大极性杂质和一些糖类成分，而60-70%乙醇在保证产品被洗脱出来的同时，极性较小的杂质却不会被洗脱下来。

（4）聚酰胺树脂富集与洗脱

将步骤（3）浓缩后的洗脱液过聚酰胺树脂进行吸附，先用10%的乙醇清洗树脂至无色后，再用浓度为90%的乙醇洗脱产品，至流出液无色，收集合并洗脱液，将洗脱液减压浓缩，回收乙醇后得含产品的浓缩液；

洗脱液通过聚酰胺树脂的吸附，能有效达到分离Thonningianin A与除去一部分杂质的作用；而通过10%乙醇洗脱掉一些大极性的色素和杂质，减少制备时的杂质干扰；90%乙醇既能快速的洗脱产品，浓缩时又能把制备原料减少到最少体积。

（5）高效制备液相色谱分离

色谱条件如下：

填料为C₁₈的色谱柱；

流动相组成为：乙腈-0.3%（V/V）磷酸水溶液，二者体积比为45：55；

检测波长为254nm；

取步骤（4）浓缩后的洗脱液用溶剂过滤器采用0.45μm有机膜过滤，滤液进样，进行Thonningianin A单体的制备分离，紫外检测器在线监测，针对性收集Thonningianin A单体的制备馏分溶液，得Thonningianin A单体溶液；