[发明专利]一种简并引物及利用该简并引物检测马铃薯Y病毒属病毒的方法有效
| 申请号： | 201310716604.1 | 申请日： | 2013-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN103642804A | 公开（公告）日： | 2014-03-19 |
| 发明（设计）人： | 章绍延;王健华;刘志昕;张雨良;余乃通;张秀春;周朋;梁洁 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 郑州联科专利事务所(普通合伙) 41104 | 代理人： | 刘建芳;杨海霞 |
| 地址： | 571101 *** | 国省代码： | 海南;66 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 引物 利用 检测 马铃薯 病毒 方法 | ||
1.一种简并引物，其特征在于，由正向引物和反向引物组成，正向引物的核苷酸序列为：5’-GTITGYGTKGAYGAYTTYAAYAA-3’；反向引物的核苷酸序列为：5’-GTRTGBCKYTCIGTRTYYTC-3’；其中，Y=C/T，K=G/T，R=A/G，B=G/T/C，I=次黄嘌呤。
2.利用权利要求1所述简并引物检测马铃薯Y病毒属病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：以样品总RNA为模板，利用上述引物进行Touch-down RT-PCR反应，反应结束后凝胶电泳检测扩增产物，在1600－1800bp位置处出现电泳条带，则判定样品中含有马铃薯Y病毒属病毒。
3.如权利要求2所述利用简并引物检测马铃薯Y病毒属病毒的方法，其特征在于，所述的Touch-down RT-PCR反应包括反转录和Touch-down PCR扩增两个过程。
4.如权利要求3所述利用简并引物检测马铃薯Y病毒属病毒的方法，其特征在于，所述反转录的反应温度为42℃；所述Touch-down PCR扩增时，第一个循环退火温度为55℃，以后每个循环退火温度降低1℃，共进行15个循环，然后用退火温度40℃进行20个循环，延伸温度为72℃。
5.如权利要求4所述利用简并引物检测马铃薯Y病毒属病毒的方法，其特征在于，对扩增的DNA片段进行序列测定后，可鉴定马铃薯Y病毒属病毒的种类。
6.权利要求1所述简并引物应用于马铃薯Y病毒属病毒Touch-down RT-PCR通用检测试剂盒。
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