[发明专利]紫花苜蓿逆境响应基因MsNAC3及其应用

权利要求书

1.一种紫花苜蓿逆境响应基因，其为MsNAC3，具有：

1）SEQ ID No.11所示的核苷酸序列；或

2）SEQ ID No.11所示核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸；或

3）在严格条件下与1）限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。

2.含有权利要求1所述基因的表达载体。

3.如权利要求2所述的表达载体，其为pBIGFP-MsNAC3。

4.权利要求3所述的表达载体的构建方法，其特征在于，以紫花苜蓿叶的总RNA反转录得到的cDNA为模板，进行PCR反应，上游引物序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物序列如SEQ ID NO.8所示；

将RT-PCR扩增产物回收后连接在pMD18-T载体上，连接产物转化大肠杆菌DH5α菌株，选取阳性克隆进行测序，用XbaI和KpnI进行双酶切，回收目的片段，连接到含有eGFP植物表达载体pBIGFP的XbaI和KpnI位点中，构建得到pBIGFP-MsNAC3。

5.含有权利要求2或3所述载体的宿主细胞。

6.权利要求1所述的基因在制备转基因植物中的应用。

7.权利要求1所述的基因在提高植物抗逆性方面的应用。

8.一种获得权利要求1所述紫花苜蓿逆境响应基因MsNAC3的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）以紫花苜蓿总RNA为模板，反转录合成cDNA第一链；

（2）以步骤（1）的cDNA为模板进行PCR，回收产物，测序正确的为紫花苜蓿逆境响应基因MsNAC3。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤（1）将紫花苜蓿幼苗放于4℃进行冷胁迫处理之后，取提取紫花苜蓿总RNA，以总RNA为模板，反转合成cDNA第一链。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤（2）的PCR方法中，所用引物序列中上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游序列如SEQ ID NO.2所示。