[发明专利]白僵菌素的制备方法

权利要求书

1.一种白僵菌素的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

1a、制备镰刀菌LF061种子液：

将菌株LF061的斜面培养物或孢子液接种于种子培养基，28℃-32℃、转速120rpm-160 rpm，培养48-72 h获得种子液；

其中所说的种子培养基为YPD培养基，其含有如下组分：Yeast Extract 10g，Peptone20g, 葡萄糖20g，加蒸馏水定容至1000 ml，121 ℃灭菌20 min；

1b、镰刀菌LF061种子液经发酵制备白僵菌素：

将上述种子液以体积百分比5%-15 %的接种量接种于液体发酵培养基，发酵温度28 ℃-32 ℃，转速120rpm-160 rpm，通气量10L-30L/分，发酵时间96h-144 h；所得发酵液分离、精制得白僵菌素；

其中所说的液体发酵培养基含有以下组分：葡萄糖5g-10g，可溶性淀粉20g-30g，工业蛋白胨20g-50g，氯化钾0.1-0.2g，磷酸二氢钾3g-5g，硝酸钠1g-1.5g，七水硫酸镁0.05g-0.1g，碳酸钙1g-2g，加水定容至1000 ml，121 ℃灭菌30 min。

2.根据权利要求1所述的白僵菌素的制备方法，其特征在于，所述发酵液分离、精制步骤为：

2a、将发酵液离心或过滤，获得白僵菌素菌丝体；

2b、用有机溶剂对菌丝体浸提1-2次，每次2-4小时，合并浸提液，减压浓缩，除去有机溶剂，得到白僵菌素粗提物； 

2c、将白僵菌素粗提物加入有机溶剂进行溶解，上样至装有聚合物色谱填料的色谱柱；

2d、使用有机溶剂与水的混合液进行梯度洗脱，分管收集洗脱液并进行在线检测，将符合要求的洗脱液合并，经浓缩、干燥，得到高纯度的白僵菌素。

3.根据权利要求1或2所述的白僵菌素的制备方法，其特征在于：所述有机溶剂为乙醇或甲醇。

4.根据权利要求2所述的白僵菌素的制备方法，其特征在于：所述梯度洗脱是指上样后，先用80%体积百分比的甲醇或乙醇水溶液洗脱2个柱体积去除杂质，然后再用甲醇或乙醇进行洗脱，洗脱速度为1-2倍柱体积/小时。