[发明专利]一种雨城丹桂愈伤组织分化及增殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组培技术领域，具体涉及一种雨城丹桂愈伤组织分化及增殖方法。

背景技术

桂花（Osmanthus fragrans Lour.），亦称山桂、岩桂、九里香、木犀，木犀科木犀属的代表种，常绿灌木至小乔木。它不仅是我国的十大传统名花之一，而且集绿化、美化、香化为一体，属观赏和实用兼具的优良园林、经济树种，深受我国人民的喜爱。

雨城丹桂（Osmanthus fragrans ‘Yucheng Dan’）是丹桂品种群中的一个优良品种，常绿大灌木，树冠卵形，花期9月中旬，着花繁密花冠斜展，花色橙红香味中等，观赏性极佳。此外环境适应性强，耐高温较耐寒，对土壤的要求不太严格，生长速度快，种植范围广，如此之多的优点使之在丹桂家族中成为珍贵的品种。

以往桂花的繁殖多以嫁接为主，扦插、压条为辅，繁殖系数小；播种繁殖存在生理后熟等原因，不能满足生产上的需要；而雨城丹桂花冠雌蕊退化，花后不结实，采用何种途径使之快速繁育成为很有价值的研究方向。组织培养作为新兴的生物繁殖技术，不但繁殖系数大，还能保持品种的优良性状，同时也是高等植物细胞工程、基因工程和改良的重要基础之一，可以短时间获得大量植物材料，从而使雨城丹桂得到快速繁殖与推广。而目前关于雨城丹桂组织培养快繁体系研究的内容较少，还不能满足使用需求。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种雨城丹桂愈伤组织分化及增殖方法，为短时间内获得大量雨城丹桂小苗提供了科学的培养基配方，丰富了雨城丹桂这一珍贵的桂花品种的组织培养快繁方法，为以后的相关研究提供一些借鉴和参考意义。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种雨城丹桂愈伤组织分化及增殖方法，包括以下步骤：

1）从健康茁壮的雨城丹桂树上，选取盛花期时的新鲜花梗，进行消毒处理；

2）无菌条件下，将处理后的材料接种于诱导及分化培养基上，温度25±1℃，全黑暗条件下，培养至分化；其中，诱导及分化培养基为：B5+6-BA2.0~3.0mg/L+2,4-D0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L，pH5.5；

3）将已分化的愈伤组织接种于增殖培养基中，温度25±1℃，光照时间为12h/天，光照强度为2500lx，25天继代增殖一次，即可；其中，增殖培养基为：B5+6-BA3.0mg/L+NAA0.10mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L，pH 5.5。

步骤1）中，从健康茁壮的雨城丹桂树上选取盛花期时的新鲜花梗，先用加入少量去污粉的自来水浸泡1小时，然后用流水冲洗3小时；在水平超净工作台的无菌条件下，将冲洗过的花梗在75%的酒精中浸泡30秒后，在2%的次氯酸钠溶液中浸泡3分钟，再用无菌水仔细冲洗5遍。

步骤2）中，诱导及分化培养基为：B5+6-BA2.0mg/L+2,4-D0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L，pH5.5。

采用诱导及分化培养基B5+6-BA2.0~3.0mg/L+2,4-D0.05mg/L，这种激素配比的培养基配方，经过30天的培养，愈伤组织的分化率较高，达到90%，而且整个花梗变成愈伤组织团状愈伤，淡黄白色颗粒，状态较好。

采用增殖培养基为B5+6-BA3.0mg/L+NAA0.10mg/L，这种激素配比的培养基配方，经过25天的培养，愈伤组织的增殖系数较高，可以达到1.8。

有益效果：与现有技术相比，本发明的雨城丹桂愈伤组织分化及增殖方法，以花梗为外植体进行愈伤组织的分化及增殖培养，采用诱导及分化培养基B5+6-BA2.0mg/L+2,4-D0.05mg/L进行诱导，经过30天的培养，愈伤组织的分化率较高，达到90%，而且整个花梗变成愈伤组织团状愈伤，淡黄白色颗粒，状态较好；采用增殖培养基为B5+6-BA3.0mg/L+NAA0.10mg/L进行继代增殖，经过25天的培养，愈伤组织的增殖系数较高，可以达到1.8，具有很好的实用性，可为后期的丛生芽诱导和基因改良工作提供大量的实验材料。

附图说明

图1是雨城丹桂花梗愈伤组织分化示意图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。

实施例1