[发明专利]用于检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体3SNP的试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 201310726083.8 | 申请日： | 2013-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN103695553A | 公开（公告）日： | 2014-04-02 |
| 发明（设计）人： | 王海燕;蒋建新;张安强;曾灵;顾玮;杨策 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学第三附属医院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京元本知识产权代理事务所 11308 | 代理人： | 黎昌莉 |
| 地址： | 400042 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 核苷酸 结合 寡聚化 结构 受体 snp 试剂盒 及其 应用 | ||
1.用于检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体3SNP的二重连接探针实时荧光PCR试剂盒，所述二重连接探针实时荧光PCR试剂盒包括:扩增引物组、测序引物，可标记的生物素，其特征在于：所述扩增引物组分别是针对NLRP3rs1539019和/或NLRP3rs10754558位点而设计的特异性序列。
2.根据权利要求1所述的二重连接探针实时荧光PCR试剂盒，其特征在于：所述NLRP3rs1539019位点的“C”突变为“A”。
3.根据权利要求1所述的二重连接探针实时荧光PCR试剂盒，其特征在于：所述NLRP3rs10754558位点的“C”突变为“G”。
4.根据权利要求1所述的二重连接探针实时荧光PCR试剂盒，其特征在于：所述扩增引物组有1～2组，包括扩增引物组Ⅰ和/或扩增引物组Ⅱ；
所述扩增引物组Ⅰ的上游引物如SEQ ID NO:1所示，所述扩增引物组Ⅰ的下游引物如SEQ ID NO:2所示；所述测序引物Ⅰ的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
所述扩增引物组Ⅱ的上游引物如SEQ ID NO:4所示，所述扩增引物组Ⅱ的下游引物如SEQ ID NO:5所示；所述测序引物Ⅱ的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
5.运用权利要求1-4任一项所述的二重连接探针实时荧光PCR试剂盒的方法，其特征在于：1）提取标本中的DNA作为模板；2）扩增引物组中的其中之一引物被生物素标记后配制PCR反应体系，并进行PCR扩增，得扩增产物；3）所述扩增引物经碱变性分开成单链，将被生物素标记的单链进行纯化，用所对应的测序引物进行焦磷酸测序及结果分析。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，PCR反应体系具体为：25μL2×PCR Mix，1.0μL扩增引物组Ⅰ的上游引物，1.0μL扩增引物组Ⅰ的下游引物，1.0μL扩增引物组Ⅱ的上游引物，1.0μL扩增引物组Ⅱ的下游引物，上述引物的浓度为0.2uM/ml，1.0μL（30ng）DNA模板，20μL水。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的循环程序为：95℃3分钟预变性；依次95℃15秒，56℃30秒，72℃20秒，进行45个循环；72℃保持5分钟，最后保持在4℃，得到扩增产物。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，用生物素标记如SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:5所示的引物。
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