[发明专利]喹啉黄标准样品的制备方法

权利要求书

1.喹啉黄标准样品的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

S1：喹啉黄的高速逆流色谱分离纯化

高速逆流色谱的分离溶剂体系：正丁醇-10%硫酸溶液-水两相溶剂体系；

①准备喹啉黄粗样；

②配制上述正丁醇-10%硫酸溶液-水的两相溶剂体系，充分振摇后静置10-14h，分层，其中，上相作为固定相，下相作为流动相；

③将喹啉黄粗样溶解于两相溶剂体系中，配制成样品溶液；

④将固定相泵入分离柱，待固定相充满管道后，打开主机速度控制器，使高速逆流色谱仪螺旋管柱按照顺时针的方向旋转，当转速达到700-900r/min时，泵入流动相，并通过六通进样阀进样，待流动相开始流出色谱柱时，收集高速逆流色谱分离后的各峰流出液，然后将收集的溶液通过高效液相色谱检测，确定目标成分；

S2：喹啉黄样品脱酸

取步骤S1中确定的目标成分，用水溶解后，置于分液漏斗中，然后用等体积的饱和正丁醇萃取三次，合并正丁醇层减压蒸干，然后用10mL水溶解后通过凝胶柱色谱（sephadexLH-20）分离，收集黄色部分，减压浓缩得到目标成分，室温干燥得纯品喹啉黄，即为喹啉黄标准品；

S3：分装与储存

将制得喹啉黄标准品用棕色瓶进行分装，室温干燥避光密封保存。

2.根据权利要求1所述的喹啉黄标准样品的制备方法，其特征是，所述正丁醇、10%硫酸溶液、水的体积比为5：1：4。

3.根据权利要求1所述的喹啉黄标准样品的制备方法，其特征是，所述步骤④中转速为800r/min。

4.根据权利要求1所述的喹啉黄标准样品的制备方法，其特征是，所述步骤④中固定相泵入分离柱的速度为20mL/min；流动相的泵入速度为2.0mL/min。

5.根据权利要求2所述的喹啉黄标准样品的制备方法，其特征是，所述步骤③为将喹啉黄粗样溶解于两相溶剂体系中，配制成浓度为25mg/mL的样品溶液。

6.根据权利要求1-5任意权利要求所述的喹啉黄标准样品的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

S1：喹啉黄的高速逆流色谱分离纯化

高速逆流色谱的分离溶剂体系：正丁醇-10%硫酸溶液-水两相溶剂体系；

①准备喹啉黄粗样；

②配制上述正丁醇-10%硫酸溶液-水的两相溶剂体系，充分振摇后静置10-14h，分层，其中，上相作为固定相，下相作为流动相，正丁醇、10%硫酸溶液、水的体积比为5：1：4；

③将将粗样200mg溶解于4mL上相和4mL下相的混合溶剂中，配制成样品溶液；

④将固定相以20mL/min的速度泵入分离柱，待固定相充满管道后，打开主机速度控制器，使高速逆流色谱仪螺旋管柱按照顺时针的方向旋转，当转速达到800r/min时，以2.0mL/min的速度泵入流动相，并通过六通进样阀进样，待流动相开始流出色谱柱时，收集高速逆流色谱分离后的各峰流出液，然后将收集的溶液通过高效液相色谱检测，确定目标成分；

S2：喹啉黄样品脱酸

取步骤S1中确定的目标成分，用水溶解后，置于分液漏斗中，然后用等体积的饱和正丁醇萃取三次，合并正丁醇层减压蒸干，然后用10mL水溶解后通过凝胶柱色谱（sephadexLH-20）分离，收集黄色部分，减压浓缩得到目标成分，室温干燥得纯品喹啉黄，即为喹啉黄标准品；

收集高速逆流色谱分离纯化后的目标成分，用水溶解后，置于分液漏斗中，然后用等体积的饱和正丁醇反复萃取三次，合并正丁醇层减压蒸干，然后用10mL水溶解后通过凝胶柱色谱（sephadexLH-20）分离，收集黄色部分，减压浓缩得到目标成分，室温干燥得即为喹啉黄标准品；

S3：分装与储存

将制得喹啉黄标准品，用棕色瓶进行分装，每瓶20mg共100瓶，编号后在室温干燥避光密封保存。