[发明专利]一种可调控删除的非病毒游离载体及其构建方法有效
| 申请号： | 201310729099.4 | 申请日： | 2013-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN103740756A | 公开（公告）日： | 2014-04-23 |
| 发明（设计）人： | 李宁;方锐;畅飞;赵馨;张磊;汤波;王建武 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 调控 删除 病毒 游离 载体 及其 构建 方法 | ||
1.一种可调控删除的非病毒游离载体，其特征在于，所述游离载体是将Cre/loxP位点特异重组酶系统与S/MAR元件组合形成一种可控的游离载体，所述S/MAR元件来源于的人β干扰素基因。
2.根据权利要求1所述的游离载体，其特征在于，所述游离载体中S/MAR序列上下游各插入一个同向loxp序列。
3.根据权利要求2所述的游离载体，其特征在于，所述游离载体的核心功能区域从5’端到3’端包括：人的EF1α启动子，loxp序列，来源于人β干扰素基因的S/MAR元件，loxp序列，CAG启动子驱动的新霉素抗性基因和TK基因的表达盒序列。
4.根据权利要求3所述的游离载体，其特征在于，在两个loxp序列之间插入荧光蛋白编码序列，作为指征标记。
5.根据权利要求4所述的游离载体，其特征在于，所述荧光蛋白编码序列为EGFP编码序列。
6.权利要求1-5任意一项所述的游离载体转染的动物细胞。
7.根据权利要求6所述的动物细胞，其特征在于，在不需要载体继续存在时，添加可穿透细胞膜的Cre酶，赋予12-24h，之后加入Ganc药物筛选即可彻底删除载体。
8.根据权利要求6或7所述的动物细胞，其特征在于，所述动物细胞为人iPS细胞。
9.根据权利要求8所述的动物细胞，其特征在于，游离载体转染人iPS细胞的方法为，将权利要求1-5任一项所述游离载体插入诱导人iPS细胞的四因子表达盒，转染人体细胞G418筛选诱导人iPS细胞系，获得人iPS细胞。
10.根据权利要求1-5任意一项所述的游离载体在iPS细胞生产以及细胞转分化中的应用。
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