[发明专利]一种基于红鳍东方鲀FoxO1基因的重组蛋白、制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于红鳍东方鲀FoxO1基因的重组蛋白，其特征在于：其含有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的基于红鳍东方鲀FoxO1基因的重组蛋白，其特征在于：所述的氨基酸序列由如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列编码。

3.一种如权利要求1所述的基于红鳍东方鲀FoxO1基因的重组蛋白的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）反转录PCR扩增红鳍东方鲀脂肪组织总RNA，扩增产物与pGEM-T载体连接得重组质粒，经双酶切后目的基因再与pET-32a(+)表达载体连接，获得重组表达质粒；

（2）将重组表达质粒转化入宿主菌，加入诱导剂IPTG诱导表达FoxO1重组蛋白；

所述的反转录PCR扩增的引物对P为：

上游引物P1：5’-CGGAATTCATGGCGGAAGCAGCCCA-3’，

下游引物P2：5’-CCGCTCGAGCCCTGACACCCAGCTGTGC-3’。

4.根据权利要求3所述的基于红鳍东方鲀FoxO1基因的重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中反转录PCR扩增的反应条件为：94℃预变性5min后进行94℃变性40s、61℃复性50s、72℃延伸2min的35个循环的扩增，72℃延伸10min后保存于4℃。

5.根据权利要求3所述的基于红鳍东方鲀FoxO1基因的重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中反转录PCR扩增的反应体系为：cDNA模版1.0μl、10μM P11.0μl、10μM P21.0μl、10×PCR Buffer2.5μl、2.5mM dNTP Mixture2.0μl、ddH2O17.0μl、1U/μl DNA聚合酶0.5μl，总计25μl。

6.根据权利要求3所述的基于红鳍东方鲀FoxO1基因的重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的宿主菌为大肠杆菌表达菌株Rosetta(DE3)。

7.根据权利要求3所述的基于红鳍东方鲀FoxO1基因的重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中取诱导培养后的菌体裂解，离心，取上清液纯化即得重组蛋白。

8.一种如权利要求1所述的基于红鳍东方鲀FoxO1基因的重组蛋白在制备调节红鳍东方鲀脂肪组织PPARγ表达量的药物组合物或饲料中的应用。