[发明专利]草莓轻型黄边病毒的快速检测试剂盒及方法

权利要求书

1.检测草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）的专用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成。

2.一种检测草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）的试剂盒，包括权利要求1所述的专用引物。

3.权利要求1所述专用引物在制备检测草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）的试剂盒中的应用。

4.权利要求1所述专用引物或权利要求2所述试剂盒在鉴定草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）病毒病中的应用。

5.一种检测草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）或检测草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）病毒病感染的方法，包括如下步骤：

（1）提取待测生物样本的基因组RNA；

（2）以步骤（1）的基因组RNA为模板，用权利要求1所述的专用引物进行逆转录环介导恒温扩增；

（3）根据步骤（2）的扩增产物鉴定所述待测生物样本是否含有草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）或者是否感染草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）病害。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述逆转录环介导恒温扩增的反应程序为：620℃45分钟，80℃10分钟。

7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述逆转录环介导恒温扩增的反应体系中，序列表的序列1所示DNA和序列表的序列4所示DNA的浓度均为1.0μM，序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA的浓度均为0.1μM。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述环介导恒温扩增的体系包括：1.0μM序列表的序列1所示DNA，1.0μM序列表的序列4所示DNA，0.1μM序列表的序列2所示DNA，0.1μM序列表的序列3所示DNA，10×Bst buffer，4mM MgSO₄，1.6mM dNTPs，0.4M Betaine，2mM DTT，5U AMV Reverse Transcriptase，25U RNase Inhibitor，8U Bst DNA polymerase，DEPC ddH₂O，扩增体系总体积为25μl。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述逆转录环介导恒温扩增产物的检测方法为下述1）或2）所述的方法：

1）扩增产物中加入0.1μl荧光染料SYBR green I，肉眼直接观察，染有草莓轻型黄边病毒的样本会有沉淀物形成并呈现黄绿色，无草莓轻型黄边病毒侵染的样本透明并呈橘红色；

2）常规电泳和紫外成像方法，感染有草莓轻型黄边病毒的样本能形成瀑布型条带。