[发明专利]草莓轻型黄边病毒的快速检测试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及草莓轻型黄边病毒的RT-LAMP检测引物组、检测试剂盒及方法。

背景技术

草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus，SMYEV)分类学上隶属弯曲病毒科（Flexiviridae）马铃薯X病毒属（Potexvirus），为单分子线形正义ssRNA病毒，长5966bp。病毒粒子弯曲线状，长约470-580nm，宽为13nm。SMYEV侵染寄主植物后，会存在于寄主植物的表皮和叶肉细胞中，主要通过多种蚜虫以持久性方式传播，病毒在介体中不能复制，也不能通过介体后代传递；嫁接可以传播，种子、花粉和植物间相互接触不传播。草莓轻型黄边病毒侵染智利草莓（Fragaria chiloensis）和凤梨草莓（Fragaria nilgerrensis）后通常无症状，侵染野草莓（Fragaria vesca）症状表现为小叶凹陷、叶缘褪绿、植株长势衰退。单独侵染时使草莓植株稍微矮化，但复合侵染时会引起叶片黄化或失绿，植株矮化，叶缘不规则上卷，叶脉下弯或全叶扭曲，严重影响植物光合作用，导致减产降低。

草莓轻型黄边病毒在草莓各栽培区分布较广，危害较重。由于草莓轻型黄边病毒蚜虫传播等原因，病毒病害防治困难，因此，建立高效灵敏的检测技术，成为解决种苗检测、早期鉴定等问题的关键，为草莓栽培提供保障。草莓轻型黄边病毒的检测技术目前包括指示植物的小叶嫁接法、血清学方法和反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）等。小叶嫁接法、血清学方法周期长、灵敏度较低、较为费时费工，反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测病毒灵敏度高，但需要特殊的仪器和试剂，检测时间也较长，在农业生产单位和技术推广部门很难应用检测。

逆转录环介导等温扩增技术检测病毒操作简便，不需要特殊的仪器和试剂，操作简单，可以在恒温条件下快速检测，不需要长时间的温度循环，不需要昂贵的PCR仪，尤其是反转录和扩增反应都能在恒定温度下同时进行，大大的降低了检测时间，并且成本较低。反应完成后，通过荧光染色可以直接观察，也减少了时间，不需要电泳和紫外成像观察检测结果。逆转录环介导等温扩增技术与其他病毒检测方法相比，快速、简便、灵敏，目前尚未有将逆转录环介导等温扩增技术在草莓轻型黄边病毒检测上的应用。

发明内容

本发明的目的是提供检测草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）的专用引物以及特异性强、灵敏度高、易于操作、结果可靠的草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）的快速分子检测试剂盒及方法。

本发明所提供的检测草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）的专用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成。

本发明还提供一种检测草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）的试剂盒，包括所述的专用引物。

本发明所述专用引物在制备检测草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）的试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围

上述专用引物或试剂盒在鉴定草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）病毒病中的应用也是本发明的保护范围。

本发明还保护一种检测草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）或检测草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）病害发生危害的方法，包括如下步骤：

（1）提取待测生物样本的基因组RNA；

（2）以步骤（1）的基因组RNA为模板，用所述的专用引物进行逆转录环介导恒温扩增；

（3）根据步骤（2）的扩增产物鉴定所述待测生物样本是否含有草草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）或者是否感染草莓轻型黄边病毒（Strawberry mild yellow edge virus）病害。

所述逆转录环介导恒温扩增的反应程序为：60℃45分钟，80℃10分钟。