[发明专利]一种用来进行植物蛋白发酵的纳豆芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域：

本发明提供一种用来进行植物蛋白发酵的纳豆芽孢杆菌，本发明进一步提供了该菌株在植物蛋白固体发酵中的应用，属于微生物发酵工程领域。

背景技术：

饲料蛋白作为第一大和第一重要原料是制约中国畜牧业发展的第一大权重因子，主控权受制于国外，因此饲料蛋白成为我国畜牧业发展的第一大原料供给瓶径，和食物供给安全瓶径，具有重要的国计民生和国民经济意义，更具有重要的国家安全意义。

豆粕经过有益菌发酵处理后，可使豆粕中的各种抗原成分、抗营养因子被有效的降低或去除，豆粕中的蛋白质被分解成大豆肽，这种大豆肽中富含许多小肽，能直接被动物吸收，而且大豆肽抗原性较低，幼畜、幼禽、虾蟹使用后发生过敏反应的概率大大降低，可明显抑制消化道疾病的发生；提高动物机体免疫力，促进动物生长；同时可大幅度减少疫苗、抗生素等药物使用量；可作为断奶仔猪、幼禽、虾蟹，尤其是许多高档经济动物的优良蛋白质来源。这一产品的推广应用，将大大降低饲料工业对鱼粉等动物性饲料的依赖性，为我国节省大量用于进口鱼粉的外汇，推动饲料工业的技术进步，社会效益和生态效益明显，同时可产生可观的经济效益，发酵豆粕已成为豆粕开发生产的热点。

但是豆粕在发酵时所采用菌种的性能会直接影响最终产品的品质。可见，采用微生物发酵豆粕的关键在于菌种的选择和发酵工艺的控制。

发明内容：

本发明提供一种纳豆芽孢杆菌，为一种新的菌株，可用来进行植物蛋白发酵。

本发明公开了上述纳豆芽孢杆菌在植物蛋白固体发酵中的用途，该菌株即可以脱除植物蛋白中的抗营养因子，从而大幅度提高植物蛋白饲料的利用率，又可以作为益生菌进入动物体肠道内，并长期存活，对动物生长发育起到增强机体免疫力并促进生长的作用。

本发明提供的一种用来进行植物蛋白发酵的纳豆芽孢杆菌，命名为纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto），该疫苗株已于2012年8月21日保藏在《中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心》，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为：CGMCC6467。

本发明所述的所述纳豆芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤完成：

1）猪粪样品采集

收集样品，冷藏备用；

2）芽孢杆菌预筛选和增殖培养

将样品进行预加热处理，并用普通营养肉汤培养；

3）单个菌落的分离

利用重复划线法获得单菌落；

4）耐胆盐筛选

用含有猪胆盐的营养肉汤培养基进行耐受性筛选，从而获得耐胆盐性较高的芽孢杆菌；

5）芽孢杆菌对致病性大肠杆菌的抑制

采用琼脂扩散法测量抑菌圈的直径，从而获得抑制大肠杆菌性能较高的纳豆芽孢杆菌。

本发明纳豆芽孢杆菌固体发酵的应用：

单因素实验。根据微生物的特点，进行单因素实验，主要影响因素为温度、时间、和接种量。

正交实验：根据筛选出的最佳固液比，进行正交实验，主要影响因素为温度、时间、和接种量。单因素试验及正交试验主要测定指标为抗原蛋白的含量，并计算抗原蛋白降解率。

经过实验测定，芽孢杆菌发酵豆粕的最佳条件为温度36℃，pH6.5，接种量10%，固液比1:0.8，发酵时间3d时，抗原蛋白降解率最高。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供的纳豆芽孢杆菌能抵抗动物肠道内的环境，包括胃中的酸性环境和十二指肠中的胆汁，顺利的在动物肠道内存活并发挥抑菌效果。以益生纳豆芽孢杆菌为发酵菌种，对大豆粕进行发酵，采用固态发酵法进行规模化生产，无论是在经济效益方面，还是在社会效益、生态效益方面，都大力推动了我国畜牧业向持续、健康、稳定的方向向前发展。

附图说明：

图1为本发明纳豆芽孢杆菌对大肠杆菌的抑菌圈；

图2~图5为本发明固液比对芽孢杆菌固体发酵效果图。

具体实施方式

通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。

实施例1

纳豆芽孢杆菌的获得与鉴定

本发明采用了以下技术路线进行筛选：

1、猪粪样品采集