[发明专利]人血管炎诊断试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.人血管炎诊断试剂盒，其特征是包括： 

（1）待检测血清标识物的标准品； 

（2）包被有识别标识物特异抗原系统的固相板； 

（3）联接有辣根过氧化酶的标识物的抗体； 

（4）洗涤液； 

（5）辣根过氧化酶底物的溶液； 

（6）终止液。 

2.根据权利要求1所述的人血管炎诊断试剂盒，其特征是：所述（1）待检测血清标识物的标准品为抗人PR3和MPO抗原免疫球蛋白G。 

3.根据权利要求1所述的人血管炎诊断试剂盒，其特征是：所述（2）包被有识别标识物特异抗原系统的固相板为包被人粒细胞的固相板、包被抗人PR3抗原免疫球蛋白G的固相板和包被抗人MPO抗原免疫球蛋白G的固相板。 

4.根据权利要求1所述的人血管炎诊断试剂盒，其特征是：所述（3）联接有辣根过氧化酶的标识物的抗体为抗非人类免疫球蛋白G抗体。 

5.根据权利要求1所述的人血管炎诊断试剂盒，其特征是：所述（4）洗涤液为磷酸盐缓冲液。 

6.根据权利要求1所述的人血管炎诊断试剂盒，其特征是：所述的（5）辣根过氧化酶底物的溶液包含A液和B液，其中A液为过氧化氢溶液，B液为四甲基联苯胺溶液，或者A液为四甲基联苯胺，B液为醋酸钠/枸橼酸缓冲液。 

7.根据权利要求1所述的人血管炎诊断试剂盒，其特征是：所述（6）终止液为2M硫酸。 

8.根据权利要求1所述的人血管炎诊断试剂盒，其特征是：所述（1）待检测血清标识物的标准品的制备方法为：由高效价抗人PR3和MPO的血清中制备免疫球蛋白G抗血清，提纯IgG，经QAE化学试剂处理血清并分离血清，将高效价的抗PR3和MPO的免疫球蛋白G血清混合制备，灭活补体，再加稳定剂处理，对所获样品用电泳法做纯度检测，计算纯度。 

9.根据权利要求3所述的人血管炎诊断试剂盒，其特征是：所述的包被人粒细胞的固相板的制备方法为：包括进行粒细胞提取，计算细胞纯度和活性检测，细胞包被 步骤，其细胞包被的方法为用1╳Hank平衡盐溶液(HBSS)稀释粒细胞，使其至终浓度约为100-1000000cells/mL，然后将悬液加入到96孔细胞培养板中，每孔100μL，静置于室温，去上清，室温干燥，后用冷甲醇固定并干燥，用封盖膜将固定细胞的微孔板封盖，放置20℃保存备用；所述包被抗人PR3抗原免疫球蛋白G的固相板和包被抗人MPO抗原免疫球蛋白G的固相板的制备方法是：以0.05M磷酸盐缓冲液作为包被缓冲液，包被抗原的浓度为0.04-1.0微克/ml，包被溶液在微孔板的孔中4℃，24小时，用去离子水洗涤两次，2%牛血清白蛋白室温封闭1.5小时后，在温度为20-28℃及湿度小于或等于30%的条件下干燥12小时，然后装袋封口，储存于4℃待用。 

10.一种人血管炎诊断试剂盒的制备方法，其特征在于： 

所述的试剂盒包括： 

（1）待检测血清标识物的标准品； 

（2）包被有标识物特异抗原系统的固相板：包括包被人粒细胞的固相板、包被抗人PR3抗原免疫球蛋白G的固相板和包被抗人MPO抗原免疫球蛋白G的固相板； 

（3）联接有辣根过氧化酶的标识物的抗体； 

（4）洗涤液； 

（5）辣根过氧化酶底物的溶液； 

（6）终止液； 

所述的待检测血清标识物的标准品的制备方法为：由高效价抗人PR3和MPO的血清中制备免疫球蛋白G抗血清，提纯IgG，经QAE化学试剂处理血清并分离血清，将高效价的抗PR3和MPO的免疫球蛋白G血清混合制备,灭活补体，再加稳定剂处理，然后对所获样品用电泳法做纯度检测，计算纯度； 

所述的包被人粒细胞的固相板的制备方法为：包括进行粒细胞提取，计算细胞纯度和活性检测，细胞包被步骤，其细胞包被的方法为用1╳Hank平衡盐溶液(HBSS)稀释粒细胞，使其至终浓度约为100-1000000cells/mL，然后将悬液加入到96孔细胞培养板中，每孔100μL，静置于室温，去上清，室温干燥，后用冷甲醇固定并干燥，用封盖膜将固定细胞的微孔板封盖，放置20℃保存备用；所述包被抗人PR3抗原免疫球蛋白G的固相板和包被抗人MPO抗原免疫球蛋白G的固相板的制备方法是：以0.05M磷酸盐缓冲液作为包被缓冲液，包被抗原的浓度为0.04-1.0微克/ml，包被溶液在微孔板的孔中4℃，24小时，用去离子水洗涤两次，2%牛血清白蛋白室温封闭1.5小时 后，在温度为20-28℃及湿度小于或等于30%的条件下干燥12小时，然后装袋封口，储存于4℃待用； 

所述的辣根过氧化酶连接抗体的采用碘酸钠法制备； 

所述的辣根过氧化酶底物的溶液包含A液和B液，其中A液为过氧化氢溶液，B液为四甲基联苯胺溶液或者A液为四甲基联苯胺；B液为醋酸钠/枸橼酸缓冲液； 

所述的终止液为2M硫酸，洗涤液为磷酸盐缓冲液。